绝经后女性血清脂肪因子瘦素、抵抗素、内脂素及Apelin

　　骨质疏松症(Osteoporosis, OP)是一种骨量减少、骨组织显微结构破坏、骨强度减低、骨脆性增加而易骨折的全身性疾病。而绝经后骨质疏松是其中的主要类型之一，与雌激素的下降直接相关，以骨转换加快，BMD 降低为主要特点。国内外已有多项研究表明Leptin 与BMD及骨转换生化指标的相关性。但尚无Resistin, Visfatin, Apelin 与骨转换生化指标的关系的临床实验。本研究旨在探索绝经后女性血清脂肪因子Leptin, Resistin, Apelin, Visfatin 与骨转换生化指标—血清BAP 和NTx 之间的关系，为骨质疏松症的防治提供科学依据。

　　1.对象及方法

1.1 对象抽取 2009 年长沙市三个社区常住人口中287 名40-80 岁绝经后女性进行研究。所有志愿者都详细询问现病史、过去史、婚育史、家族史等，排除患有影响骨代谢疾病、服用影响骨代谢药物的志愿者。影响骨代谢的疾病包括：糖尿病、甲状腺和甲状旁腺功能改变、生长激素缺乏、Cushing 综合症等代谢内分泌系统疾病，慢性肝肾疾病、慢性胃肠疾病、骨关节病、血液系统肿瘤、肿瘤骨转移或骨肿瘤、有腰椎或髋部骨折史及各种遗传性、体质性骨病等。影响骨代谢药物包括：雌激素、类固醇激素、抗惊厥药、利尿剂、甲状旁腺激素、降钙素、维生素D 类似物、二磷酸盐、氟化物等。运动量为每周体育锻炼（慢跑、练剑、打球、游泳等活动）的时间总和（小时/周）。研究前所有受试者均签署知情同意书。

　　1.2 实验材料、方法

1.2.1 血清Leptin, Resistin, Visfatin, Apelin, BAP, NTx 的检测

受试者于当日上午7：30-9：30 之间采集空腹静脉血，分离血清后置于－70℃冰箱保存，血清Leptin 采用Diagnosis Systems Laboratories Inc.(Webster,TX,USA)酶联免疫吸附试验(ELISA)盒测定，批内CV6.0%，批间CV7.1%，单位以ng/ml 表示； Resistin, Visfatin, Apelin-36均采用Phoenix Pharmaceuticals (Belmont,CA,USA)ELISA试剂盒测定， BAP,NTx 分别 MetraBiosystems Inc.(Moutin View,CA,USA)及Ostex International(Seattle, WA)ELISA 试剂盒测定。

　　Resistin(批内CV6.1%，批间CV7.3%)，单位以ng/ml 表示；Visfatin(批内CV5.6%，批间CV7.0%)，单位以ng/ml 表示；Apelin-36(批内CV5.1%，批间CV6.3%)，单位以pg/ml 表示。

　　BAP 批内和批间变异系数分别为5.8%和7.1%，单位以U/L 表示；NTx 批内和批间变异系数分别为5.3%和7.9%，单位以nM BCE/ml 表示，(BCE 为人骨胶原当量)。

　　1.2.2 BMD 及体成分测量

采用美国 Hologic QDR-4500A 型DEXA 测量每例受试者者腰椎正位腰1 至腰4(lumbarspine)、左侧髋部总体(Total hip)、左侧前臂(Total forearm)面积BMD，单位g/cm2。仪器由专人操作。该仪器重复测量33 例受试者(正常和不正常)不同部位的BMD 3 次，以评价该仪器的精确度，所有部位的变异系数(CV)平均值为0.92％±0.42％，95％可信区间为0.64％～1.20％。该仪器每日测量腰椎Hologic 体模，长期CV 为0.33％～0.40％。根据世界卫生组织的定义，研究个体的BMDSD 低于同性别峰值骨量的2.5 SD 以上，被确定为骨质疏松症。

　　采用美国 Hologic QDR-4500A 型扇形束DEXA 仪作全身扫描测出全身(Total body)BMD，单位g/cm2；测出全身体脂(fat mass)、瘦体重(lean tissue mass)。测定时要求受检者只穿贴身衣裤，不佩带任何影响BMD 及体脂测量的饰物。体脂(kg)=脂肪组织重(kg)；瘦体重(kg)= 瘦组织重(kg)。该仪器的对体脂及瘦体重的变异系数(CV)为0.7%-1.8%，对全身BMD的变异系数(CV)小于1.5%。

　　1.2.3 统计方法

所有资料输入 SPSS11.0 软件包进行统计分析。结果用均数±标准差( x ±s)表示，各组间均数比较用方差分析；一般相关用直线相关(Pearson)分析。

　　2.结果

2.1 研究对象基本特征描述

2.2 血清BAP 和NTx 与BMD 的关系

直线相关分析显示：BAP 与总体BMD、腰椎BMD、髋部总体BMD、前臂BMD 均呈负相关(r=-0.210, r=-0.236, r=-0.223, r=-0.226 ,p 均＜0.05)，校正年龄和BMI 后，相关性都依然存在(r=-0.168, r=-0.187, r=-0.169, r=-0.175, p 均＜0.05)。NTx 与总体BMD、腰椎BMD、髋部总体BMD、前臂BMD 均呈负相关(r=-0.238, r=-0.232, r=-0.239, r=-0.221, p 均＜0.05)，校正年龄和BMI 后，相关性都依然存在(r=-0.201, r=-0.189, r=-0.193, r=-0.185, p 均＜0.05)。

　　2.3 血清Leptin、Resistin、Apelin、Visfatin 与BAP 和NTx 的关系

2.4 绝经后骨质疏松女性血清Leptin, Resistin, Apelin,Visfatin 及骨转换生化指标水平

年龄匹配绝经后女性116 名按BMD 分组：BMD 正常对照组56 名，骨质疏松组60 名为两组间一般资料、血清Leptin, Resistin, Apelin, Visfatin 水平比较。两组间年龄及绝经时间、身高、体重、BMI 无显着差异(P 均>0.05)。绝经后骨质疏松女性两组间血清Leptin,Resistin, Apelin、Visfatin 水平无差异(P 均>0.05)。绝经后骨质疏松女性骨转换生化指标(BAP、NTx)水平较年龄相匹配的正常对照组增高(P 均<0.05)

3.讨论

血清 BAP 是成骨细胞的特异产物，反映成骨细胞的活性，是敏感而特异性强的骨形成指标。NTx 反映破骨细胞的活性，是敏感特异的骨吸收标志物。联合检测骨形成和骨吸收指标能预测骨丢失率，可用于鉴别个体是否存在快速骨丢失及易患骨质疏松。研究显示绝经后骨质疏松妇女骨形成指标BAP 与骨吸收指标均高于正常对照组。Iki[7]等报道BAP 与正常妇女腰椎部位BMD 呈负相关。Minisola[8]等发现，BAP，NTx 与围绝经期妇女腰椎侧位、股骨近端和桡骨BMD 呈负相关。较高的骨代谢转换指标浓度提示较高的骨代谢转换水平，与较低的BMD 相关。本研究结果显示：绝经后女性BAP、NTx 与总体、腰椎、髋部总体、前臂BMD 均呈负相关，校正年龄和体重指数后，相关性依然存在。

　　Leptin 是由肥胖(ob)基因编码、脂肪细胞合成分泌的一种脂源性激素，主要由白色脂肪组织产生，血清Leptin 浓度与体脂相关。近年发现其与骨代谢有密切的关系，可从多个角度调节骨代谢。原代培养人的成骨细胞表面有Leptin 及Leptin 受体的表达，瘦素可直接作用于骨髓基质细胞，刺激其向成骨细胞分化和骨基质的矿化 [9]；另一方面，瘦素通过中枢神经和(或)交感神经系统抑制骨形成[10]。但研究者对绝经期女性血清瘦素水平与BMD 及骨生化指标之间的关系进行的多项研究，目前尚无一致的结论。Blain[11]等报道，绝经后妇女血清Leptin 水平与骨吸收指标尿Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(CTx)负相关，是BMD 的独立预测因子。但也有研究表明，老年女性血清Leptin 水平与骨形成指标BAP 正相关，与骨吸收指标血NTx 相关无统计学意义。我们研究表明，绝经后妇女血清Leptin 水平与BAP 相关无统计学意义，与NTx 呈负相关，校正年龄和体脂后，相关无统计学意义。血清Leptin 与骨转换指标的关系仍未明确，需进一步研究。

　　Resistin 是2001 年发现的由白色脂肪组织特异分泌一种新的多肽类信号分子。它具有抵抗胰岛素的作用，遂命名为抵抗素(Resistin)。Oh[4]等报道Resistin 与成年男性腰椎BMD 呈负相关，并经多元回归分析认为Resistin 是腰椎BMD 的独立影响因子。

　　Apelin 于1998 年作为APJ 的配体首次分离出来，Apelin 以77 个氨基酸的前蛋白原形式分泌，后在不同的组织中被加工生成分别含36,13,12 个氨基酸的多肽。其中含36 个氨基酸的多肽Apelin-36—— Apelin 的成熟形式，与APJ 亲和力最强。后Medhurst[12]等研究发现人体组织广泛表达Apelin 和APJ，Apelin-APJ 在免疫、神经内分泌、心血管系统、消化系统、肥胖及胰岛素抵抗等方面均具有重要的作用。最近研究发现人和小鼠成骨细胞表达Apelin 及其受体APJ，Apelin 通过APJ 促进成骨细胞增殖并通过APJ/PI3K/Akt 信号通路抑制无血清诱导的人成骨细胞凋亡[6]。提示Apelin 在骨代谢过程中的正性调节作用。

　　Visfatin 是新近发现的在内脏脂肪特异性的高表达一种脂肪因子。 Visfatin 与胰岛素受体结合，激活胰岛素信号通道及其下游信号分子的磷酸化，表现为类似于胰岛素的降血糖作用[13]。Visfatin 与BMI、体脂百分比、人内脏脂肪的数量正相关，在肥胖和2 型糖尿病人中Visfatin 水平升高。最近研究发现Visfatin 通过类胰岛素的胰岛素受体底物磷酸化途径促进人成骨细胞增殖、Ⅰ型胶原表达[5]。

　　我们研究表明，与正常对照组比较，绝经后骨质疏松女性血清Resistin, Apelin, Visfatin水平无明显差异，且Resistin, Apelin, Visfatin 水平与BAP, NTx 不存在相关性。

　　综上所述，本研究发现绝经后妇女血清Leptin 与BAP 不相关，与NTx 呈负相关，校正年龄和体脂后，相关无统计学意义。并首次表明绝经后女性血清Resistin, Apelin, Visfatin 水平与BAP 和NTx 不相关。这提示Leptin, Resistin, Apelin, Visfatin 不是骨代谢的关键调控因子。脂肪因子在体内的作用涉及多系统，故其对于骨代谢的调节需要进一步的动物实验及临床对照观察证实。