正交实验优化黄蒿消炎颗粒的乙醇提取工艺研究

　　黄蒿消炎颗粒是由黄芩、白芷等组成的中药新药复方制剂，具有清热泻火、消肿止痛的功效。根据处方中各药材有效成分或有效部位的性质，确定了白芷等药材以乙醇回流法提取。本文拟以欧前胡素的含量和干浸膏收率为评价指标，通过正交实验设计法，采用HPLC 含量测定方法[1-2]，对提取条件进行了考察优化，为该药的制剂研究提供实验依据。
　　
　　1 仪器与试药
　　
　　岛津 LC-20AT 高效液相色谱仪（SPD-20A 紫外检测器）；METTLER TOLEDO 电子天平(AB204-E)；色谱柱：Welchrom-C18(4.6*250mm，5μm) ；欧前胡素对照品：由中国药品生物制品检定所提供；甲醇为色谱纯；纯净水（乐百氏纯净水），其余试剂为分析纯。
　　
　　2 方法与结果
　　
　　2.1 正交试验设计
　　试验选择乙醇浓度（A）、提取时间（B）、提取次数（C）和溶剂用量（D）4 个因素，按表1 的条件进行L9（34）正交试验，对干浸膏收率和欧前胡素两个指标进行考察。
　　
　　2.2 浸出物得率的测定
　　上述所得 9 个正交试验提取液分别定容到一定体积。各精密量取20ml 至已恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃烘箱中干燥3h，取出置干燥器内冷却30min 后迅速精密称重，计算浸出物得率，结果见表2。
　　
　　2.3 欧前胡素的含量测定
　　2.3.1 色谱条件
　　色谱柱：Welchrom-C18，5μm，4.6*250mm，流动相为甲醇-水（70：30）[3]，流速为1.0ml/min，检测波长为300nm，柱温35℃。以上色谱条件下所得的图谱见。
　　2.3.2 对照品及供试品溶液的制备
　　2.3.2.1 对照品溶液的制备精密称取欧前胡素对照品6.31mg 置100ml 容量瓶中，用甲醇溶解，稀释至刻度。
　　2.3.2.2 供试品溶液的制备按处方比例称取白芷等药材适量置于1000ml 圆底烧瓶中，按表1 条件进行操作。每次提取之后过滤，合并滤液，定容。精密吸取20ml 于蒸发皿中，低温蒸干，用甲醇定容并转移至10ml 容量瓶中，超声5min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀即得。
　　2.3.3 线性关系考察
　　精密吸取对照品（63.1μg/ml）溶液2、4、8、10、16μl，按上述色谱条件注入液相色谱仪，测定。以进样量为横坐标，相应峰面积为纵坐标，计算回归方程为：Y=175012X+3322.5（r=0.9997）。结果表明欧前胡素在0.1262-1.0096μg 之间有良好的线性关系。
　　2.3.4 样品含量测定
　　分别取 2.3.2 项下得到的9 组供试品溶液，0.45μm 微孔滤膜过滤，各精密吸取5μl，分别进样，测定峰面积，计算欧前胡素的含量。结果见表2。
　　
　　2.4 正交试验结果及方差分析
　　对所得数据进行直观分析和方差分析，结果见表2 和表3。可见，在乙醇浓度、提取时间、提取次数和溶剂用量4 个因素中，C 因素即提取次数有显著性影响，影响因素C＞A＞D＞B；且C3，A1 为最佳，B2 与B3，D2 与D3 差不多，从大生产节约成本考虑选B2 和D2，故提取最佳工艺为：加8 倍量60%乙醇，提取3 次，每次1.5 小时。
　　
　　2.5 验证试验
　　精密称取与正交试验等量等比例药材，按最佳提取条件，加入8 倍量60%乙醇提取3次，每次1.5 小时。结果浸膏得率分别为21.98%，欧前胡素含量为1.03mg/g。可见，所筛选出来的工艺合理可行，稳定可靠，具有可操作性和重复性。
　　
　　3 讨论
　　
　　3.1 指标物质的选择
　　白芷具有散风除湿，通窍止痛功效。药理试验表明有解热、抗炎、镇痛、解痉、抗癌作用[4]。近年来研究报道，白芷主要成分总香豆素具有明显的镇痛作用[5]，其中以欧前胡素含量最高，因此，本试验合理选择了欧前胡素为指标物质对黄蒿消炎颗粒的乙醇提取工艺进行了优化。
　　
　　3.2 流动相的选择
　　在摸索流动相条件时，曾参考中国药典流动相，即甲醇：水（55：45），但出峰时间太晚。故采用增大甲醇的比例，参照文献，选用了甲醇：水（65：35）[6-7]，甲醇：水（62：38）[8]及甲醇：水（70：30）进行试验，结果甲醇：水=70：30 为流动相时，样品分离度好，峰形对称，且阴性无干扰。故选用甲醇：水=70：30 为流动相。
　　
　　3.3 样品处理
　　在进行样品处理挥干时，为了尽量避免有效成分随乙醇的挥发而损失，试验采用了低温挥干样品，保证了含量测定的准确性。
　　本实验采用正交设计的试验方法对黄蒿消炎颗粒的醇提工艺进行优化筛选，所建立的高效液相色谱法方法简便，结果准确可靠。通过对样品含量测定和验证试验表明确定的提取工艺科学可行，为以后该制剂的制备提供依据，也为白芷及其复方制剂含量测定提供参考。

　　
　　参考文献
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　　[2] 邹文莉，马逾英，郭丁丁，等.白芷在中药复方制剂中的使用及质量控制[J].中成药，2007，29（9）：1350-1352.
　　[3] 张志梅，翟志席，杨重军，等.白芷体内欧前胡素和异欧前胡素含量研究[J].中国中药杂志，2005，30（17）：1377-1388.
　　[4] 张廷模.临床中药学[M].北京：中国中医药出版社，2004.
　　[5] 王梦月，贾敏如，马逾英，等.白芷总香豆素的药理作用研究[J].时珍国医国药，2005，16（10）：954-956.
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　　[7] 李海燕，岑志芳，林玉明.中药新药复方天麻头风胶囊中白芷的含量测定研究[J].时珍国医国药，2006，17（6）：965-966.
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