王氏保赤丸对抗生素诱导肠道菌群失调小鼠肠道保护作用及肝脏毒性的影响研究

作者：李建婷 邝枣园 宋珊珊 肖珊珊 高智群 郭新峰 罗海燕 （1广州中医药大学微生物与寄生虫学教研室，广东广州510405；2广州中医药大学第一附属医院病理科，广东广州510405；3广州中医药大学DME中心，广东广州510405）
［摘要］目的：通过观察王氏保赤丸对小鼠肠道组织，肝脏组织的影响，探讨该药是否既能清热泻下又能避免苦寒伤胃，以及对肝脏的毒性作用，为合理使用该药提供实验依据。方法：建立抗生素引起菌群失调小鼠模型和不同剂量的王氏保赤丸灌胃小鼠模型，与正常小鼠比较，评价王氏保赤丸对小鼠肠道组织及肝脏的影响情况。结果：灌胃14 d后王氏保赤丸高、中、低剂量组均未出现模型组的小肠绒毛充血、变平、变短、萎缩、倒伏等现象。与模型组对比，高、中、低剂量组肠黏膜均较完整，中、高组黏膜固有层见较多炎性细胞浸润，但小肠绒毛均有变长、杯状细胞增多；回盲部的病理结果提示该药高、中、低剂量组对回盲部均无损伤。肝脏病理结果显示王氏保赤丸高、中、剂量组对肝细胞均有损害作用，低剂量组对肝细胞损害较轻微。结论：经合理配伍之后，该药保存了大黄、黄连等苦寒药物的清热解毒泻下作用，对肠道黏膜不仅无损伤，且有一定的保护作用。该药对肝脏有损伤，有一定的肝毒性，肝脏损伤者应慎用。
［关键词］王氏保赤丸；肠道黏膜；肝脏毒性；小鼠
Effect of Wanshibaochiwan on intestine and liver of antibiotic-induced intestinal dysbacteriosis miceLI Jian-ting，KUANG Zao-yuan，SONG Shan-shan，et al (Department of Microbiology and Parasitology，Guangzhou University of Chinese Medicine，College of Fundamental Medical Science，Guangzhou 510405，China)Abstract：ObjectiveTo observe the change of Wanshibaochiwan (WSBCW) in the intestine and liver of antibiotic-induced intestinal dysbacteriosis mice，and provide data and evidence for proper use of it in clinicMethodAntibiotic-induced intestinal dysbacteriosis mice model group and WSBCW groups of various doses were made to compare the morphology of their intestine and liver between groups and with normal miceThe mice were given gastric lavage for 14 days by high dosage，middle dosage and low dosage WSBCW［147 mg/(kg•d)，49 mg/(kg•d)，17 mg/(kg•d)］in WSBCW groups，and Lincomycin (04 ml/d ) in model group，NS(04 ml/d) in normal groupThe structure of appendix and small intestine，liver were examined after 14 daysResultsThe congestion，flattening，shortening，atrophy，and lodging of small intestinal villosity microvessels of mice that showed in model group were not showed in 14-day WSBCW groupsThe intestinal mucosa were relatively complete in all doses WSBCW groups compared to model groupThere were more inflammatory infiltration in mucoderm in high and medium WSBCW groups，but with lengthening of small intestinal villosity microvessels，and increasing of goblet cellsPathological observation showed that all doses groups of WSBCW did not damage ileocecal junctionLiver cell damages were found in medium and high dose WSBCW groups，but the damage was very slight in low dose groupConclusionWSBCW is safe and even shows protective effect to intestinal tract，but shows hepatotoxicity，patients with liver injury should be cautious when using it
Key Words:Wangshibaochiwan；Intestinal mucosa；Hepatotoxicity；Mice
基金项目：广东省高校师资建设启动费2008（编号：A1080008）王氏保赤丸由大黄、黄连、川贝、制南星、生姜淀粉、荸荠粉、巴豆霜、朱砂组成，具有清热泻火、泻积导滞、化痰平喘等功效。临床用于小儿消化系统和呼吸系统的治疗，近年亦用于成人的消化系统疾病治疗［1］。其作用机制研究多侧重于胃肠动力学及脾虚证方面［2-4］，因该方面的主要作用在于其清热泻下功能，本研究旨在探讨长期应用该药是否会导致消化系统功能紊乱、肠道黏膜损伤，以及对肝脏的毒性作用，为其在临床上的合理用药提供实验依据。
1材料与方法
11材料
111动物：SPF级昆明种小鼠，体重18~22 g，雌雄各半，购自广东省医学实验动物中心，许可证号：SCXK(粤)2008-0002，实验动物质量合格证号：粤监证字2008A022。
112药物与试剂：①盐酸林可霉素注射液（天津药业集团新郑股份有限公司，国药准字H41021052，产品批号：090101）；②王氏保赤丸（中国南通精华制药股份有限公司，国药准字Z32020645，产品批号：080703）。
12方法
121动物分组及给药：昆明种小鼠30只，随机分为5组：正常组、模型对照组（抗生素造模）、王氏保赤丸低剂量组、王氏保赤丸中剂量组、王氏保赤丸高剂量组，每组6只。正常组给予生理盐水灌胃，04ml/d。模型对照组给予盐酸林可霉素灌胃，04 ml/d。王氏保赤丸低剂量组给予王氏保赤丸灌胃，17 mg/(kg•d)；王氏保赤丸中剂量组给予王氏保赤丸灌胃，49 mg/(kg•d)；王氏保赤丸高剂量组给予王氏保赤丸灌胃，147 mg/(kg•d)。共灌胃14 d。以上各组均全天供应充足饮水，每晚10点后禁食，次日8时灌胃后给予充足饲
122形态行为观察：每天观察和记录各组小鼠外形、活动、饮食与排便情况。
123病理检查：取各组小鼠肝脏、小肠及回盲部用生理盐水冲洗后放置4%多聚甲醛中过夜，行HE染色，观察病理损伤。
124血液分析：取各组小鼠全血放置抗凝管中，血液分析仪分析白细胞、红细胞及血小板等计数情况。
2结果
21形态行为情况：正常组及王氏保赤丸低剂量组、中剂量组小鼠饮食正常，行动活跃，被毛平整光滑，粪便正常。王氏保赤丸高剂量组小鼠摄食量下降，精神状态一般，行动欠活跃，大便稀软。抗生素对照组小鼠摄食量下降，精神萎靡，行动迟缓，被毛无光泽，畏寒扎堆，大便稀湿。
22病理观察结果
221小肠病理观察结果：正常组小肠绒毛粗大，表面黏膜上皮完整，杯状细胞较多。模型组：小肠绒毛充血,肠绒毛变平、变短、萎缩、倒伏，小肠绒毛轮廓不清,部分腺上皮脱落。王氏保赤丸低剂量组：肠黏膜上皮较完整，杯状细胞较多，黏膜固有层可见炎性细胞浸润。王氏保赤丸中剂量组：肠黏膜较完整，黏膜固有层见较多炎性细胞浸润。王氏保赤丸高剂量组：小肠绒毛变长、杯状细胞增多，固有层见炎性细胞浸润。见图1~5。
图1正常组
图2模型组
图3王氏保赤丸低剂量组
图4王氏保赤丸中剂量组
222回盲部病理观察结果：正常组回盲部表面黏膜光滑，上皮完整，杯状细胞较多。模型组：肠黏膜萎缩、变薄,部分黏膜脱落、缺失。王氏保赤丸低剂量组：肠黏膜上皮较完整，杯状细胞较多。王氏保赤丸中剂量组：肠黏膜上皮较完整。王氏保赤丸高剂量组：肠黏膜上皮较完整，杯状细胞增多。见图6~10。
图5王氏保赤丸高剂量组
图6正常组
图7模型组
图8王氏保赤丸低剂量组
图9王氏保赤丸中剂量组
图10王氏保赤丸高剂量组
图11正常组
图12模型组
图13王氏保赤丸低剂量组
图14王氏保赤丸中剂量组
图15王氏保赤丸高剂量组
223肝脏病理观察结果：正常组小鼠肝小叶结构清晰，肝细胞索排列整齐，呈放射状，肝窦正常，胞核结构清晰。模型组肝脏实质扩张充血,肝小叶结构不清，肝细胞索紊乱。 肝细胞排列拥挤,界限不清,广泛浊肿，胞浆、胞核淡染,出现散在和片状气球样变,可见点状坏死和炎性细胞浸润及细胞内淤胆。王氏保赤丸低剂量组肝小叶结构清晰，肝细胞索排列整齐，呈放射状，肝窦正常，胞核结构清晰，汇管区以及肝细胞之间可见散在炎性细胞浸润。王氏保赤丸中剂量组肝小叶结构不清，肝细胞索紊乱。肝细胞排列拥椒,界限不清,广泛浊肿，胞浆、胞核淡染,出现散在和片状气球样变,汇管区以及肝细胞之煎可见较多炎性细胞浸润。王氏保赤丸高剂量组肝窦扩张充血不明显，肝小叶结构不清，肝细胞索紊乱。肝细胞排列拥挤,界限不清,广泛浊肿。见大量炎性细胞浸润及肝细胞内淤胆。见图11~15。
24血液分析结果：各组小鼠血液分析结果比较，差异无统计学意义（P＞005）。
3讨论
长期以来，对苦寒类中药的正确服用是人们关心的问题，长期服用三黄片、或含有大黄、黄芩、黄连等苦寒类中药会导致胃肠功能下降，肠道菌群紊乱，其结果与长期使用抗生素会导致肠道菌群失调，胃肠吸收功能障碍结果类似［4-6］。如何合理配伍中药，使其功效最大化而不良反应最小化是一个值得探讨的课题。王氏保赤丸系清代通州名医王胪卿祖传几世的秘方，由北京中医药大学王绵之教授监制的纯中药制剂，在临床上已应用100余年，广泛用于小儿厌食、呕吐、腹泻、便秘等胃肠功能紊乱，其疗效确切，已成为家庭必备药物，但对其长期应用是否有不良反应及注意事项较少研究。本研究从使用不同剂量王氏保赤丸予小鼠灌胃与使用抗生素致小鼠肠道菌群失调组对比，观察其形态行为、肠道黏膜和肝脏的病理变化情况，为中药的合理配伍、正确使用及注意事项提供实验依据。
从本次实验结果看，除王氏保赤丸高剂量组小鼠出现摄食量下降、活动减少、及排便质量稀软外，中剂量组与低剂量组无明显改变。小肠病理结果提示王氏保赤丸高、中、低剂量组均未出现抗生素组的小肠绒毛充血、变平、变短、萎缩、倒伏等现象。与模型组对比，中高剂量组肠黏膜均较完整，黏膜固有层虽见较多炎性细胞浸润，但小肠绒毛均有变长、杯状细胞增多；可见该药对小肠黏膜有一定保护作用。回盲部的病理结果亦提示该药高中低剂量组对回盲部均无损伤。与黄连解毒汤长期大量使用会造成肠壁水肿现象相比［4］，王氏保赤丸中虽有大黄、黄连等苦寒药，同时亦配伍了干姜、巴豆霜、制南星等辛温之品以制约，避免寒凉太过损伤阳气。全方寒温并用，既保存了大黄等苦寒药物的清热泻下作用，又增强了对肠黏膜的保护作用。该药经灌胃14 d后高、中、低剂量组小鼠肠道黏膜均未出现损伤，高剂量组小鼠摄食量下降，大便稀软，小肠绒毛变长、杯状细胞增多，固有层见炎性细胞浸润，回盲部肠黏膜上皮较完整，杯状细胞增多。说明该药既有清热泻下作用，对肠道黏膜又有保护作用。而肝脏病理结果显示王氏保赤丸高、中剂量组对肝细胞均有损害作用，低剂量组对肝细胞损害较轻微，提示该药有一定的肝毒性，肝脏损伤者应慎用。
4参考文献
［1］鲍志祥王氏保赤丸的药理研究及临床应用概况［J］上海中医药杂志，2001，35（12）：42
［2］王爱云，陆健，刘竞天王氏保赤丸对实验性“脾虚证”小鼠治疗作用的研究［J］上海中医药杂志，2004，38（8）：53
［3］李旋，陈燕，孙小玉，等王氏保赤丸的胃肠道调节作用的研究［J］北京中医，1999，18（5）：59
［4］罗海华,董姝,周红，等黄连解毒汤对小鼠肠黏膜组织结构的影响［J］长春中医药大学学报，2009，25（1）：14
［5］张亚群,王沛,王仁杰,等肠道菌群失调对小鼠脾脏的影响［J］华北国防医药，2005，17（4）：859
［6］曲长江,刘劲,宫艳华,等大黄泻下与劳倦过度单、复因素造模脾虚小鼠过氧化与抗氧化改变的比较研究［J］中国中西医结合消化杂志,2001，1(4):213