加减防己黄芪汤对糖尿病皮肤溃疡大鼠血清NO、ET1水平的影响

作者：黄在委 柴可夫 宋光明 金 怡 作者单位：浙江中医药大学 杭州 310053

　　【摘要】 [目的]观察加减防己黄芪汤对糖尿病皮肤溃疡大鼠血管内皮功能的影响。[方法]选用SD雄性大鼠90只，随机选取6只为正常对照组，其余大鼠以尾静脉注射四氧嘧啶40mg/kg，选取符合糖尿病诊断标准的大鼠用于建立糖尿病皮肤溃疡模型造模，并随机分成6组，模型对照组、加减防己黄芪汤干预的高、中、低剂量组，中药对照组、西药对照组。实验结束后断头取血检测NO、ET1含量以加减防己黄芪汤对观察对血管内皮功能的影响。[结果]与模型组比较，各治疗组大鼠血清NO含量均有不同程度升高，而血浆ET1含量却有不同程度的降低，其中以加减防己黄芪汤高剂量组变化最明显(P<0.001)，中剂量明显(P<0.01)，低剂量、中药对照组次之(P<0.05)。加减防己黄芪汤各剂量组的调节作用与剂量呈现相关性。[结论]加减防己黄芪汤可通过升高血清NO含量、降低血浆ET1水平来改善血管内皮功能。

　　【关键词】 糖尿病;皮肤溃疡;一氧化氮;内皮素1;防治;防己黄芪汤

　　Fund project： Subject supported by Special Foundation of Zhejiang Provincial TCM Modernization (No：Z.C.J.Zi[ 2005 ]241)Effect of Revised Astragalus Tetrandrae Decoction on Rats Serum NO and ET1 with Diabetic Derma Ulcer Huang Zaiwei，Chai Kefu，Song Guangming，et al Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou(310053)

　　Abstract： [Objective]To explore the cure effect of Astragalus Tetrandrae Decoction on vessel endodermis function of rats with diabetic derma ulcer.[Method]Select 90 SD male rats，take 6 as normal control group，others were injected by tail vein with Alloxan;choose rats in accordance with diabetic diagnosis to set up model of diabetic derma ulcer，and randomly divide them into 6 groups： model control(1)，high，middle and lowdosage groups(2，3，4)of Astragalus Tetrandrae Decoction，TCM control(5)and WM control(6);after test，make decapitated and take blood for NO and ET1 to observe effect of the decoction on vessel endodermis.[Result]Compared to model group，all NO in treated groups was raised in different extent,While plasma ET1 content reduced in different degree;among which，group 2 was the most obvious，then groups 3 and 5;the regulation was related with dosage.[Conclusion]The decoction can improve vessel endodermis function by raising NO and reducing ET1 level.

　　Key words： diabetes;dermal ulcer;NO;ET1;prevention;Astragalus Tetrandrae Decoction

　　糖尿病皮肤溃疡发病基础是脾虚失运，浊瘀经络，积久成毒，化腐伤肌。故提出运脾通络法是防治糖尿病足(皮肤溃疡)的有效方法[1]。据此我们以防己黄芪汤为基本方，结合临床化裁出八味中药，制成加减防己黄芪汤。观察该方对糖尿病皮肤溃疡大鼠血清NO、ET1水平的影响，以探讨其作用机制。

　　1 材料与方法

　　1.1 实验动物 面军清洁级雄性SD大鼠90只，体重(200±20)g，由浙江省实验动物中心提供，许可证号：SCXK(浙)20030001。

　　1.2 药物 加减防己黄芪汤(炙黄芪 15g、苍术10g、当归10g、汉防己10g、忍冬藤15g、玄参10g、鬼箭羽10g、威灵仙10g)，由浙江省中药研究所制剂室提供。盐酸二甲双胍片：正安医药(天津)有限公司，批号：060509。糖脉康颗粒：成都中汇制药有限公司，批号：060914。消旋山莨菪碱片：杭州民生药业集团有限公司，批号：107D285。

　　1.3 糖尿病皮肤溃疡大鼠模型的建立 给大鼠喂饲高脂饲料(50 %基础饲料、10 %熟猪油、 25%蔗糖、15%蛋黄粉)7d后，在大鼠尾静脉注射四氧嘧啶40mg/kg，5d后测血糖，筛选血糖值在20～33mmol/L之间为符合标准的糖尿病大鼠，建立糖尿病大鼠模型。然后用戊巴比妥钠麻醉大鼠后，用刀片在大鼠小腿划一个约1cm长的切口，深达皮下，并注入1ml金黄色葡萄球菌悬液(由浙江中医药大学生命科学院提供)，以引起皮肤溃疡、甚至坏死，制作成大鼠皮肤溃疡模型。

　　1.4 实验动物分组 大鼠90只随机选取6只为正常对照组(正常组)，其余84只均以尾静脉注射四氧嘧啶40mg/kg，除8只不符合糖尿病诊断标准的大鼠予以剔除外，76只用于建立糖尿病皮肤溃疡模型造模，随机分成6组，模型对照组16只、加减防己黄芪汤干预的高剂量组(防己黄芪高剂量)12只、中剂量组(防己黄芪中剂量)12只、低剂量组(防己黄芪低剂量)12只、中药糖脉康对照组(中药对照组)12只、化学药物二甲双胍加6542阳性对照组(西药对照组)12只。

　　1.5 给药剂量与方法 加减防己黄芪汤根据临床用药剂量，折算成大鼠使用剂量，高、中、低剂量分别是：12g/kg、6g/kg、3g/kg(分别为成人临床日用药量的20、10、5倍，成人体重按60kg计);糖脉康颗粒剂量10g/kg(成人日用药量的10倍，体重按60kg计);盐酸二甲双胍片125mg/kg，消旋山莨菪碱片5mg/kg(成人日用药量的10倍，体重按60kg计)。各组药物在灌胃时根据大鼠体重，稀释成相同的用量。正常对照组给予基础饲料，同时用与各药物治疗组相同用量的生理盐水灌胃，每日1次。其余6组除给予高脂高糖饲料外，模型组还用与各药物治疗组相同用量的生理盐水灌胃，每日1次;加减防己黄芪汤高、中、低剂量组分别用12g/kg、6g/kg、3g/kg的加减防己黄芪汤灌胃，每日1次;中药对照组用10g/kg的糖脉康溶解液灌胃，每日1次;西药对照组用125mg/kg的二甲双胍片灌胃，8周后开始联合消旋山莨菪碱片5mg/kg溶解液灌胃，每日1次。各组均自由饮水，干预治疗10周。

　　1.6 NO和ET1水平的检测 血清一氧化氮(NO)浓度采用化学法测定，其应用原理是NO遇氧及水生成硝酸盐及亚硝酸盐，后二者遇硝酸盐显色剂可生成淡红色偶氮化合物，通过比色可间接测知NO浓度。NO测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。血浆ET1水平采用放射免疫法(RIA)测定，试剂盒由北京北方生物技术研究所提供。所有样本均由专人严格按产品说明书操作。

　　1.7 统计学方法 采用SPSS 11.5统计软件。计量资料数据以均数±标准差(x±s)表示，采用方差分析对各组均数进行显著性检验，P<0.05时有统计学意义。

　　2 结果

　　血清一氧化氮(NO)的变化，血浆ET1水平的变化 见表1。表1 各组大鼠血清NO、血浆ET1水平与模型组比，*P<0.05，▲▲ P<0.01，△△△P<0.001

　　3 讨论

　　糖尿病皮肤溃疡的发病原因主要是血管病变、神经病变、并发感染等三个方面。而血管病变导致血液循环障碍，局部组织呈慢性缺血、缺氧状态，直接影响溃疡愈合的程度及其预后，并且由于局部组织的缺血、缺氧，易于并发感染，导致溃疡发生且难以愈合[24]。故认为血管病变是糖尿病皮肤溃疡发病的重要病机之一。血管内皮功能的改变是糖尿病血管并发症的始发因素。而ET是由血管内皮细胞合成和释放的具有强烈缩血管和促进细胞生长增殖的活性多肽[5];NO 是由内皮细胞合成释放的一种具有很强舒血管作用的血管活性物质，被称作内皮源性舒张因子;在保持血管稳定上起关键作用，NO 还可抑制血小板的凝集，血管平滑肌的增殖以及抑制白细胞黏附于血管壁。

　　本研究结果显示，与正常组比较，模型组大鼠血清NO含量显著降低，而血浆ET1水平均显著升高，说明糖尿病皮肤溃疡大鼠血管内皮功能受损，血管内皮受损是糖尿病皮肤溃疡发病的重要原因。而血管内皮功能受损被认为是导致糖尿病微血管病变和大血管病变的主要机制。本实验通过不同剂量的加减防己黄芪汤干预治疗后，与模型组比较，各治疗组不同程度地升高大鼠血清NO含量，降低血浆ET1含量，对大鼠的NO、ET1水平起到调节、修缮作用，尤其是加减防己黄芪汤高剂量组改善最为明显，说明加减防己黄芪汤对糖尿病大鼠血管内皮功能具有良性调节作用，这可能是加减防己黄芪汤干预糖尿病皮肤溃疡大鼠的机制之一。

　　【参考文献】

　　[1] 宋光明，柴可夫，杨明华，等.论运脾通络法防治糖尿病足[J].中华中医药学刊，2008，26(9)： 19721973.

　　[2] 阙华发，张臻，王云飞，等.益气化瘀方对糖尿病溃疡大鼠 Smad3、Smad4表达的影响[J].上海中医药杂志，2007，41(2)： 2427.

　　[3] 青春，林炜栋，刘琰，等.糖尿病合并创面难愈等并发症形成机制的研究.∥陆树良.烧伤创面愈合机制与新技术[M].北京： 人民军医出版社，2003：135154.

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　　[5] Lam HC.Role of endothelin in diabetic vascular complications[J].Endocrine，2001，14(3)：277284.