胸腺素α1凝胶剂的制备与质量控制

　　【摘要】 　　目的 制备胸腺素α1凝胶剂并建立质量控制方法。方法 以卡波姆940为基质制备胸腺素α1凝胶剂，采用高效液相色谱法测定凝胶剂中胸腺素α1的含量。结果 胸腺素α1在0.001～0.04 mg/ml浓度范围内线性关系良好(r=0.999 9)，平均回收率100.13%，RSD=1.20%(n=3)。结论 胸腺素α1凝胶剂制备方法可行，含量测定方法简便，准确。

　　【关键词】 胸腺素α1凝胶剂;制备;质量控制

　　Preparation and quality control of thymosin alpha1 gel

　　ZHANG Hongmei,ZHENG Qiuyu，WANG Dan

　　(Jilin Medical College,Jilin City,Jilin Province,132013;Jilin Province Cooperation of Chinese and Western Medicine Hospital,Jilin City,Jilin Province,132001,China)

　　Abstract:Objective Objective to prepare thymosin alpha1(Tα1)gel and establish quality control method. Methods Carbomer 940 was used as matrix to prepare Tα1 gel and the content of Tα1 was determined by HPLC. Results The linear relationship was good ranging from 0.001～0.04 mg/ml(r=0.9999).The average recovery rate was 100.13% with RSD of 1.20%(n=3). Conclusion The established method was proved to be suitable for preparation of Tα1 gel and the determination method was simple and accurate.

　　Key words:thymosin alpha1 gel;preparation;quality control

　　胸腺素α1(thymosin α1,Tα1)是GoldStein等最早从牛胸腺组织中TF5中分离出来的一种含有28个氨基酸的酸性多肽。Tα1作为一种免疫增强剂，主要用于各类免疫缺陷和免疫抑制疾病[13]。此外，还有文献中报道Tα1对促进创面的愈合和疤痕修复上有显著的疗效[4]，通过胸腺素α1的作用，免疫细胞对创面局部的调节作用被“加速”或“促进”，从而使整体愈合的速度和质量发生明显的变化。在半固体制剂基质的选择上，以释药快、手感好的卡波姆为基质，制备胸腺素α1 凝胶剂。并对所制备的凝胶剂进行稳定性研究，为实际生产提供实验依据。

　　1 试剂与制备

　　1.1 仪器与药品

　　Tα1(海南双城药业提供，纯度99%);卡波姆(goodrich公司);甘露醇(天津化学试剂三厂);三乙胺(天津化学试剂三厂);氮酮(广州精细化学工业公司);丙二醇(沈阳化学试剂厂);乙腈(天津化学试剂三厂，色谱纯);高效液相色谱(安捷伦1100)。

　　1.2 基本处方

　　根据文献及以前的研究结果，选择卡波姆为凝胶基质，用三乙胺调节pH值及生物粘附性。甘露醇为主药稳定剂，甘油为保湿剂，油溶性氮酮为促进剂，丙二醇为保湿剂、协同促进剂，尼泊金乙酯为防腐剂。

　　1.3 制备工艺

　　聚合物相：将尼泊金乙酯加至蒸馏水中，加热搅拌使其完全溶解，冷却;缓慢加入CP 940，边加边搅拌，使其分散均匀，过夜、灭菌、备用。药物溶液：将胸腺素α1、甘露醇、丙二醇、氮酮溶于适量的纯水中，用0.2 μm微孔滤膜过滤。 将上述两种溶液混合，用三乙胺调节pH至6.8～7.0，即得。

　　2 结果

　　2.1 性状

　　本品为质地细腻，色泽均匀的乳白色透明凝胶，无任何刺激性气味。

　　2.2 检查

　　酸碱度：取3个批号的凝胶剂各5 g，分别置烧杯中加纯化水30 ml，搅拌至完全溶解，测得pH平均值在6.7～7.0之间，符合外用软膏剂不大于8.3的要求。

　　粘度：取3批凝胶剂，分别进行测定，结果平均粘度为(40.10±0.10)Pa/s。

　　其他均符合凝胶剂的有关规定。

　　2.3 色谱条件

　　色谱柱：C18(4.6×250 mm,5 μm)Agilent;流动相：A为乙腈水(10∶90)，B为乙腈水(30∶70)磷酸盐缓冲液(pH 6.8);洗脱梯度：B 0%～6%;检测波长210 nm;流速0.8 ml/min。柱温30℃;进样量20 μl。

　　2.4 系统适应性实验

　　理论塔板数按Tα1峰计算不低于2 000。

　　2.5 供试品溶液的制备

　　精密称取Tα1凝胶2 g，用流动相溶解，振荡混匀，离心(4 000 rpm，5 min，4℃)取上清液，并稀释至质量浓度为0.1 mg/ml的贮备液。精密量取贮备液适量，用流动相溶液分别稀释至质量浓度为1、2、4、8、10、20、40 μg/ml的溶液，各进样20 μl，记录峰面积。结果表明，回归方程为：Y=12 233X+4.239，r=0.999 9，线性范围为0.001～0.04 mg/ml。

　　2.6 精密度试验

　　精密称取Tα1对照品适量，用水溶解并稀释至质量浓度为1 mg/ml的贮备液，在其色谱条件下，精密量取贮备液适量，用流动相稀释至质量浓度为0.02 mg/ml的溶液，进样20 μl，重复进样5次。测定峰面积，计算相对标准偏差，RSD=0.92%;于日内不同时间分别测定，RSD=1.66%;于不同日间测定，RSD=1.84%。

　　2.7 重复性试验

　　取同一批样品，按含量测定项下操作，测定，重复操作5次，结果RSD%=1.26%，说明本法具有良好的重现性。

　　2.8 回收率测定

　　按处方比例配成空白基质，然后精密加入不同量的胸腺素α1制成凝胶剂，精密称取适量(约20 g)于100 ml容量瓶中，按样品测定项下操作，求出峰面积比值，结果代入回归方程，计算回收率，结果见表1。表1 回收率实验结果(略)

　　2.9 含量测定

　　依前述方法制备3批胸腺素α1凝胶剂样品，测定含药量，结果批号1的标识量(%)分别为98.58、101.85、98.51(平均99.65)，RSD为1.92%;批号2的标识量(%)分别为98.04、100.36、101.70(平均100.03)，RSD为1.85%;批号3的标识量(%)分别为99.69、100.07、101.97(平均100.58)，RSD为1.21%。

　　3 影响因素试验

　　3.1 光照试验

　　样品置于光照箱中，光照条件(4 500 Lx)下放置，分别于5 d和10 d取样，按考察项目要求进行检查，与0 d结果比较，结果见表2。表2 影响因素实验结果(略)

　　3.2 高温试验

　　样品在40℃条件下放置，分别于5 d和10 d取样，按考察项目要求进行检查，与0 d结果比较，结果见表2。

　　3.3 高湿试验

　　样品在92.5%RH条件下放置，分别于5 d和10 d取样，按考察项目要求进行检查，与0 d结果比较，结果见表2。

　　3.4 离心试验

　　取3批样品各10 g，装于带刻度的离心管中，以转速4 000 r/min离心30 min，凝胶无分层现象。

　　3.5 热耐寒试验

　　取3批样品各适量，装入密闭的包装盒内，分别置40℃恒温箱恒温8 h，置-20℃冰箱24 h，凝胶均无分层现象。

　　3.6 加速及留样试验

　　加速试验：样品以玻璃瓶密封包装后，在温度25℃，相对湿度75%的条件下放置3个月，于1、2、3和6月取样，按考察项目要求进行检查，与0 d结果比较，结果见表3。表3 加速实验结果(略)

　　长期试验：样品以玻璃瓶密封包装后，在4℃条件下放置6个月，于3和6月取样，按考察项目要求进行检查，与0 d结果比较，结果见表4。表4 4℃下长期实验结果(略)

　　4 讨论

　　国内外对于Tα1在烧伤、烫伤方面的应用还仅限于研究阶段，并无任何相关产品应用于临床，因此有必要在这些方面进行全面而深入的探讨，这对开发一种新用途、新给药途径的产品具有一定的参考意义。卡波姆具有良好的水溶性，附着力强，按其粘度的不同分为934、940和941等规格，是制备凝胶剂十分理想的基质材料。用卡波姆940为基质制成的胸腺素α1凝胶剂，具有制备工艺简单，质量可控，稳定性好等特点，能满足临床用药的要求。

　　【参考文献】

　　[1]Pica F,Fraschetti M,Matteucci C,et al.High doses of thymosin alpha 1 enhance the antitumor efficacy of combination chemoimmunotherapy for murine B16 melanoma[J].Anticancer Res,1998，18(5 A):35713578.

　　[2]周霞秋.胸腺肽α1在慢性病毒性肝炎抗病毒治疗中的应用[J].临床内科杂志,2006,23(12)：808811.

　　[3]胡晓磊,赵允召.胸腺肽α1及其作用机制的研究进展[J].肠外与肠内营养，2007，14(5)：309312.

　　[4]张雁，张燕，刘树人，等.胸腺肽的免疫调节作用与烧伤创面的愈合[J].中国医师杂志，2000，2(9)：523527.