雪灵芝提取物清除羟自由基和抑制脂质过氧化作用

　　【摘要】 　　目的 研究雪灵芝提取物清除羟自由基(·OH)和抑制脂质过氧化作用。方法 采用组织匀浆MDA比色法测定不同浓度的雪灵芝提取物对小鼠肝脏自发性脂质过氧化的作用。利用Fenton 反应产生·OH,研究雪灵芝提取物对·OH的清除作用,计算半数抑制率(IC50)。结果 雪灵芝提取物对小鼠肝组织自发性MDA的抑制率醇提物>水提物;·OH的IC50为醇提物>水提物。结论 雪灵芝提取物有较强的体外抗氧化活性,且活性与浓度呈明显的量效关系。

　　【关键词】 雪灵芝提取物;脂质过氧化;自由基

　　Free Radical Scavenging and Antilipoperoxidant Properties of Arenaria Kansuensis Extracts

　　FU Xiang, CHEN Wei, DUAN Xiao-qun, et al

　　(The Affiliated Hospital of Guilin Medical College, Guilin 541001, China;Guilin Medical College, Guilin 541004, China)

　　Abstract：Objective To study the ·OH free radical scavenging and antilipoperoxidant properties of Arenaria kansuensis extracts. Methods The effect of the Arenaria kansuensis extracts on lipid peroxidation were tested by tissue homogenate MDA of mice. ·OH was produced by Fenton reaction to study the scavenging effects of Arenaria kansuensis extracts on·OH and IC50 was calculated. Result The effect of alcohol extract was stronger than water extract on MDA generation spontaneously in liver of mice, and samely on the potency of scavenging free radicals (IC50). Conclusion Arenaria kansuensis extracts have strong function on antioxidant activity and obviously related to the concentration.

　　Key words：Arenaria kansuensis extracts;lipid peroxidation;free radical

　　雪灵芝系石竹科蚤缀属多年生草本植物,藏药名为阿仲嘎保。雪灵芝最早的药用记载可追朔到公元7世纪宇妥·元旦贡布所著的《四部医典》和公元17世纪第司·桑结加措所著《秘诀遗补》。雪灵芝以全草入药,性味甘寒,有清热解毒、利胆退黄、通淋止痛的作用,主治流感、黄疸、肺炎、筋骨疼痛、淋病等,还具有抗缺氧功效,对酒精性肝损伤有保护作用。雪灵芝无论是水提物还是醇提物都具有抗炎、抗免疫作用[1]。本实验对雪灵芝不同提取物的体外抗氧化性进行了研究,为进一步开发雪灵芝产品提供依据。

　　1 实验材料

　　1.1 动物

　　昆明种小鼠,雌雄各半,体重202 g,桂林医学院实验动物中心提供,许可证号：scxk2007-0001。

　　1.2 仪器与试剂

　　雪灵芝由西藏阿仲嘎保生物制品有限公司提供。752-GW型紫外分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)、FA2004电子天平(上海精科天平),小型三用水箱(北京医疗设备厂),XH-B型旋涡混合器(江苏康健医疗用品有限公司)、LD-0.8离心机(北京医用离心机厂)、旋转蒸发器(RE-52型,上海亚荣仪器厂)。

　　丙二醛(MDA)测定试剂盒、考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒,均为南京建成生物工程研究所产品。石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、无水乙醇、蒸馏水、邻二氮菲、硫酸亚铁、过氧化氢均为分析纯,PBS液为自制。

　　2 实验方法

　　2.1 雪灵芝提取物的制备

　　雪灵芝全草粉碎,以6倍量的95%乙醇加热回流提取3次,每次1 h,合并提取液,浓缩干燥得雪灵芝乙醇提取物。残渣挥干乙醇,用6倍量的蒸馏水加热回流提取3次,每次1 h,合并提取液,浓缩干燥得雪灵芝水提取物[2]。

　　2.2 雪灵芝提取物对小鼠肝脏自发性脂质过氧化的影响

　　小鼠禁食12 h后摘除眼球放血处死,取肝脏,在0～4 ℃下用生理盐水制成5%肝匀浆。实验分为对照组(10%肝匀浆)、阳性组(维生素C组)和高、中、低3个剂量的雪灵芝提取物组(10%肝匀浆和雪灵芝不同溶剂提取物配液)。以硫代巴比妥酸法测定MDA含量,并计算抑制率。抑制率(%)=(对照组MDA-提取物组MDA)/对照组MDA×100%。

　　2.3 雪灵芝提取物对羟自由基的清除作用

　　采用亚铁离子催化过氧化氢产生羟自由基(·OH)的方法。在样品管中加0.75 mmol/L的邻二氮菲溶液1 mL、PBS 2 mL和1 mL样品,旋涡混合器混匀后,加0.75 mmol/L的硫酸亚铁溶液1 mL,旋涡混合器混匀后,加0.01%过氧化氢溶液1 mL,置恒温水浴中37 ℃保温1 h。反应液置比色皿中,于分光光度计中在536 nm测定吸光度As。用1 mL蒸馏水代替1 mL样品,波长处测定吸光度为Ap。吸光度为Ab的管不加过氧化氢和样品,以蒸馏水代替。计算羟自由基的清除率及半数抑制率(IC50)。清除率(%)=(As-Ap)/(Ab-Ap)×100%。

　　3 统计学方法

　　所有数据均以—(—数)±s,表示,采用SPSS11.5统计软件,以t检验进行统计学处理。

　　4 结果(见表1、表2)表1 雪灵芝提取物对小鼠肝脏自发性脂质过氧化的影响，表2 雪灵芝提取物对·OH的清除作用(略)。

　　5 讨论

　　近年来,有文献报道了对雪灵芝种族分布、化学成分、药理及应用开发等方面的研究。雪灵芝的医疗效果与其含有皂苷、生物碱、多糖、香豆素、氨基酸等多种功能性成分有关,此外,它还含有18种氨基酸(其中包括8种人体必需氨基酸),10余种微量元素,并含有多种维生素和较多的钙,以及雪灵芝素A、B、C、D等[1]。雪灵芝既有明显的药理价值又具备一定的食品保健功能,是一种珍贵的药用植物,其进行工业化开发利用的前景十分广阔。本实验提取了2种雪灵芝提取物,考察雪灵芝的体外抗氧化活性,为其药理作用提供依据。

　　脂质过氧化产物等可导致人体细胞氧化损害、老化、致癌和动脉硬化等多种疾病。过氧化脂质大部分由肝细胞产生,其分解也主要在肝脏。MDA是过氧化脂质的主要降解产物,其含量可反映脂质过氧化的程度,故MDA的水平测定可用作检测抗过氧化作用。本实验结果表明,雪灵芝提取物可明显降低小鼠自发性MDA的生成。·OH是反应药物抗氧化活性的重要指标。本实验利用Fention反应产生·OH：H2O2+Fe2+=·OH+OH+Fe3+。Fe2+与邻二氮菲生成红色配合物,加入雪灵芝提取物后,减弱了·OH对Fe2+/邻二氮菲的氧化作用,引起自由基的变化,通过测定其吸光度值的变化,推断雪灵芝提取物对·OH的作用。结果表明,雪灵芝提取物对羟自由基有较好的清除作用,特别是醇提物是天然高效的自由基清除剂。

　　雪灵芝醇提取物较高的体外抗氧化活性可能与其中含有黄酮类化合物有关。黄酮类化合物具有的多酚结构,能提供活泼质子,与自由基结合成稳定的产物,因而有较强的抗氧化作用[3]。黄酮类成分具有保肝、扩冠、抗炎、降低血管脆性,解除痉挛、增强心脏收缩作用,还有一定程度的抗菌及抑制肿瘤细胞等作用。

　　【参考文献】

　　[1] 帝玛尔·丹增彭措.晶珠本草[M].北京：民族出版社,1986.

　　[2] 陈奇.中药药理实验方法学[M].上海：上海科学技术出版社,1996.67.

　　[3] 张培刚,郑鸿雁,昌有权,等.松针黄酮的体外抗氧化作用研究[J].食品科学,2005,26(9)：506-508.