RP-HPLC法测定尿囊素乳膏的含量

　　【摘要】 目的 建立尿囊素乳膏的含量测定方法。方法 以XTerraRP18(4.6mm×250mm，5μm)为色谱柱，甲醇-水(0.02∶0.78)为流动相，流速为0.8ml·min-1，检测波长为217nm，采用反相高效液相色谱法测定其含量。结果 尿囊素浓度在12.78～68.16μg·ml-1范围内线性关系良好(r=0.9999，n=5);平均回收率为99.9%;RSD为0.61%(n=9)。结论 本方法简便、灵敏、准确，可用于该制剂的质量控制。

　　【关键词】 尿囊素 乳膏 反相高效液相色谱法

　　Determination the Content of Allantoin in Allantoin Cream by RP-HPLC

　　SHAO Zhu-min, et al.

　　The Affiliated Hospital of Xuzhou Medical College, Xuzhou 221002 China

　　【Abstract】 Objective To establish a method for determination the content of allantoin in allantoin cream. Methods The XterraRP18 column(250nm×4.6nm) was used. The mobile phase consisted of methanol-water(0.02:0.78,v/v) at a flow rate of 0.8 ml·min-1,the detection wavelength was 217nm.Results The content of the principal agent was determined by RP-HPLC. The linear range of Allantoin was 12.78～68.16μg·mL-1 (r=0.9999，n=5). The average recovery rate was 99.9% and RSD was 0.61%(n =9). Conclusions The method is simple, sensitive, accurate and can be used for quality control of allantoin cream.

　　【Key words】 Allantoin Cream RP-HPLC

　　尿囊素(Allantoin)是一种有多种功用的皮肤科及外科用药，具有止血、收敛、和角质溶解作用，在皮肤科应用较广泛，临床上常用于银屑病、鱼鳞性皮肤病、皮肤干燥皲裂、瘙痒性皮肤病等的治疗[1]。根据文献报导[2]，0.2%的尿囊素的角质松解性与10%～20%尿素相等，而无尿素的刺激性，并具有局部麻醉作用，能刺激组织生长，促进细胞新陈代谢，加快伤口愈合。尿囊素的含量测定多采用分光光度法、薄层扫描法和HPLC法[3-5]。通过实验研究，采用反相液相色谱法测定其含量，取得结果较满意，现报道如下。

　　1 仪器与试药

　　美国Waters高效液相色谱仪(包括1525二元高压梯度泵、717自动进样器、2487双波长检测器);高速离心机(美国Abbott公司);TG328A型全机械加码分析天平(上海长江科学仪器厂);KS-80D型超声清洗机(宁波海曙科生超声设备有限公司);XW-80A旋涡混合器(上海医科大学仪器厂);UV-2401PC(日本岛津公司)。

　　尿囊素化学对照品(中国药品生物制品检定所，批号：100431-200401);尿囊素原料(湖南九典制药有限公司，批号：050623)，含量99.3%;乳膏基质(天津市天骄制药有限公司，批号：060511);甲醇(上海凌峰化学试剂有限公司，色谱纯);丙三醇、乙醇、丙二醇均为药用或分析纯，水为蒸馏水，尿囊素乳膏(1%，本院制剂室配制)。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件

　　色谱柱：Waters XTerra RP18(4.6mm×250mm,5μm);流动相：甲醇-水(0.02∶0.78)，流速：0.8ml·min-1;检测波长217nm;灵敏度：2.000AUFS;柱温：30℃;进样量20μl。

　　2.2 试液的制备

　　2.2.1 对照品溶液的制备

　　准确称取尿囊素对照品约40mg,置50ml容量瓶中,加入50℃的热蒸馏水溶解,用蒸馏水定容至50ml容量瓶中,涡旋2min，即得每1ml中含尿囊素0.852mg的储备液。

　　2.2.2 供试品溶液的制备

　　准确称取乳膏约0.25g，加约70℃的蒸馏水溶解并完全转移至100ml的容量瓶中，轻轻振摇，超声脱气10min,并加水稀释至刻度，摇匀，放置冰箱过夜，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，得测试样品溶液。

　　2.2.3 空白乳膏溶液的制备

　　按乳膏制剂处方比例，准确称取乳膏基质适量，按“2.2.2”方法制备，得空白乳膏基质溶液。

　　2.3 专属性试验

　　在“2.1”色谱条件下，尿囊素的保留时间约为3.9min，峰形对称，乳膏中的基质不干扰尿囊素的含量测定，结果见图1。

　　2.4 标准曲线的绘制

　　分别精密吸取对照品储备液0.15、0.25、0.35、0.45、0.60、0.8ml，分别置10ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，各进样20μl。以尿囊素峰面积(A)为纵坐标，尿囊素浓度(C)为横坐标，进行线性回归,得回归方程为A=191.3+1.473×104C(r=0.9 999，n=5)。尿囊素检测浓度在12.78～68.16μg·ml-1范围内线性关系良好。

　　2.5 精密度试验

　　取浓度为21.30、38.34μg·ml-1对照品溶液，按“2.1”色谱条件连续进样6次,根据测定的尿囊素的峰面积计算RSD分别为0.14%、0.21%。

　　2.6 回收率试验

　　精密量取尿囊素对照品储备液适量共9份，按处方比例加入空白乳膏基质，用水稀释成适当浓度，按“2.2.2”项下方法操作，分别取滤过液进样，将峰面积带入回归方程计算回收率。结果见表1。表1 回收率试验结果(略)

　　2.7 稳定性试验

　　在本试验条件下, 对照品及供试品溶液室温放置0、2、4、6 、8、24h后,测定尿囊素的浓度，结果表明，尿囊素在24h内稳定，RSD为0.64%。

　　2.8 样品测定

　　按“2.2.2”项下制备供试品溶液，按照“2.1”项下色谱条件各进20μl，以峰面积带入回归方程计算样品的含量,结果详见表2。表2 样品含量测定结果(略)

　　3 讨论

　　尿囊素在热水中溶解，在碱中或在水中长时间煮沸易破坏, 制备测定试液时，温度不要超过70℃;另外试液需放置冰箱冷藏，以便容易过滤，保护液相色谱柱。

　　在反相高效液相测定时，流动相的pH值对测定影响较大，选择甲醇-磷酸盐缓冲液、氯仿-甲醇-水、甲醇-水的流动相进行考察，结果甲醇-水(0.02∶0.78)及0.8ml·min-1的流速分离效果好，乳膏基质不干扰主药的含量测定，结果较满意。

　　【参考文献】

　　[1]张溜明，徐晓.尿囊素乳膏的研制与质量控制[J].海峡药学，2004，16(2)：30-31

　　[2]吴磊明，余晓冬.尿囊素凝胶的制备及质量控制[J].岭南皮肤性病科杂志,2002,9(1):75-76

　　[3]姜玲，施明德，谢东梅.紫外分光光度法测定复方尿囊素乳膏中尿囊素的含量[J].安徽医科大学学报，2000，35(6)：480-481

　　[4]张留记,屠万倩,都恒青.薄层扫描法测定怀山药降糖肠胃舒散中尿囊素的含量[J].中国中药杂志,2001,26(8):567-568

　　[5]王海波,蔡宝昌.反相高效液相色谱法测定不同产地山药中尿囊素的含量[J] .中药新药与临床药理,2004,15(3):190-191