祛腐生肌膏促进感染创面愈合作用的实验研究

　　【摘要】 目的 观察祛腐生肌膏对感染创面的作用，为中医古方和临床用药提供科学依据。方法 采用新西兰大白兔12只，制作感染创面动物模型，形成36个创面，随机分为实验组、药物对照组和空白对照组，每组12个创面。实验组用祛腐生肌膏，药物对照组用红霉素软膏，空白对照组用生理盐水进行换药治疗，分别于伤后7天在创面肉芽组织取材，测定肉芽组织蛋白质含量，计数成纤维细胞、毛细血管，检查脓液中吞噬细胞数，记录创面愈合率、愈合时间。结果 祛腐生肌膏可以促进创面成纤维细胞及毛细血管的增殖(P<0.01);增加创面蛋白质含量(P<0.01)，促进肉芽组织生长，提高创面愈合率(P<0.01)，缩短创面愈合时间(P<0.01)。结论 祛腐生肌膏具有促进感染创面愈合的作用，其机制包括促进组织修复细胞和炎性细胞的增殖,促进肉芽组织生长。

　　【关键词】 感染创面;创面愈合; 祛腐生肌膏

　　Experimental study of the effect of Qu Fu Sheng Ji ointment on promoting infected wound healing

　　CHEN Xueling, LIU Yufei

　　1. Nursing Department, The Affiliated Xuzhou Hospital of Nanjing University of Traditional Chinese Medicine, Xuzhou,

　　Jiangsu 221003, China; 2. School of Clinical Medicine, Xuzhou Medical College, Xuzhou, Jiangsu 221004

　　Abstract： Objective To observe the effect of Qu Fu Sheng Ji ointment on infected wounds and to explore the mechanism of action so as to provide scientific basis for classical prescriptions of TCM and clinical medication. Methods Animal models of wound infection were established in 12 New Zealand rabbits with 36 wounds, which were randomly randomized into experimental group, drug control group and blank control group, with 12 wounds in each group. The experimental group was treated with Qu Fu Sheng Ji ointment (or Ointment of Removing Putrefaction and Promoting Tissue Regeneration); drug control group was treated with erythromycin ointment and the control group treated with normal saline for dressing treatment alone, respectively. Samples of granulation tissues were obtained 7 days after injury to determine the protein levels, counts of fibroblasts and capillaries as well as the phagocytic counts in the pus, and the proportion of wound healing and wound healing time were recorded. Results Qu Fu Sheng Ji ointment can promote the proliferation of fibroblasts and capillaries of the wounds (P<0.01), increase the protein content of the wounds (P<0.01), promote the growth of granulation tissue and increase wound healing proportion (P<0.01), and reduce the healing time (P<0.01). Conclusion Qu Fu Sheng Ji ointment has the effect of promoting the healing of infected wounds, the mechanism of which includes promoting cell repair and the proliferation of inflammatory cells and growth of granulation tissue.

　　Key words: infected wound; wound healing; Qu Fu Sheng Ji ointment已换

　　祖国医学的长期临床实践证明，中药对于创面愈合有着显著的作用，祛腐生肌膏为南京中医药大学附属徐州医院老中医经验方，已用于临床多年。本实验观察祛腐生肌膏对感染创面的作用，现报道如下。

　　1 材料和方法

　　1.1 动物模型及分组

　　采用新西兰大白兔12只，雌雄各半，体重2.25～2.5 kg，由徐州医学院实验动物中心提供。于实验前1周购入，单笼喂养，自由饮水与摄食,实验当日禁食。用2%戊巴比妥钠按30 mg/kg的剂量静脉麻醉，动物背部剃净毛备皮，面积约为20 cm×15 cm。在备皮区常规消毒，在距腰部脊柱旁开2 cm处用特制创伤切割器(打孔器，直径1.5 cm)在兔背部切割直径约为1.5 cm圆形创面3个，深达肌层，肌层伤口厚度约0.3 cm，止血后用污土污染创面，以油纱条、敷料、胶带固定，2天后去除覆盖物，见创面周围充血红肿，分泌物增多，并出现少量脓苔附着。12只兔形成36个创面，随机分为实验组、药物对照组、空白对照组，每组12个创面，每天统一时间用药。

　　1.2 药物组成及制剂加工

　　祛腐生肌膏由紫草、象皮、当归、生龟板、生地、血余炭、白芥子、生石膏、生炉甘石、白蜡等组成，按一定比例及炮制方法，由南京中医药大学附属徐州医院制剂中心制成软膏，装盒备用(自制制剂批号：030108)。

　　1.3 用药方法

　　方法参照文献[1-2]，实验组每天换药时用生理盐水清洗创面后，外涂祛腐生肌膏5 g，用敷料包扎，每天换药1次。药物对照组每天用生理盐水清洗创面后，外涂红霉素软膏5 g，用相同敷料包扎，每天换药1次。空白对照组每天仅用生理盐水清洗创面1次，用相同敷料包扎，每天换药1次。

　　1.4 肉芽组织蛋白质含量测定

　　在伤后第7天取新生肉芽组织，采用考马斯亮蓝法测定肉芽组织蛋白质含量，所用试剂由南京建成生物工程研究所提供。取(0.05±0.005) g肉芽组织，置入浓度为1 mol/L的氢氧化钠溶液10 ml中48 h，使蛋白质充分溶解，用751型紫外分光光度计分别测定260 nm和280 nm D值，并根据下列公式计算蛋白质的含量。蛋白质含量(mg/g)=1.45×D280 nm-0.74×D260 nm,计算出肉芽组织中的蛋白质含量。

　　1.5 组织学检查

　　伤后第4、8 天取各组动物创面组织, 10%甲醛溶液固定标本,石蜡包埋切片后常规苏木精-伊红染色。每个标本随机在创面中心及创缘四周选择5个高倍视野,计数肉芽组织中成纤维细胞数和新生毛细血管数,并求其均值。

　　1.6 脓液涂片检查吞噬细胞数

　　取创面浓液按常规涂片3～5张，以瑞氏染色法染色，光学显微镜下计数整张涂片的呑噬细胞数。

　　1.7 创面愈合率及愈合时间的测定

　　各组分别于伤后第6、8、12、14天用涤纶投影膜覆盖创面，描绘创缘形态，在方格计算纸上计算出创面面积，计算创面愈合率。创面愈合率=(1-现伤口面积/原伤口面积)×100%。观察各组创面完全愈合所需时间。

　　1.8 急性毒性试验

　　方法参照文献[1-2]。

　　1.9 统计学处理

　　计量资料数据以±s表示，用SPSS 10.00软件进行统计分析。计量资料组间比较采用方差分析和q检验，率的比较采用χ2检验。P<0.05认为差异有显著性。

　　2 结 果

　　2.1 伤后第7天3组创面肉芽组织蛋白质含量的比较

　　伤后第7天，实验组创面肉芽组织蛋白质含量高于药物对照组和空白对照组(P<0.01)。见表1。表1 伤后第7天3组创面肉芽组织蛋白质含量的比较(略)

　　2.2 组织学观察结果

　　2.2.1 肉芽组织中成纤维细胞数的比较

　　在肉芽组织形成早期,成纤维细胞大量增殖。中期数量急剧增多,排列密集,并向创面表浅部位生长。晚期,成纤维细胞转变成纤维细胞。在伤后第4、8天，计数肉芽组织中成纤维细胞数，实验组的成纤维细胞数高于空白对照组和药物对照组(P<0.01)。见表2。

　　2.2.2 肉芽组织中新生毛细血管形态及数量的比较

　　实验组和药物对照组肉芽组织内均可见大量毛细血管增生,毛细血管分支多且与肉芽组织表面垂直排列,肉芽组织中有大量成纤维细胞及各类白细胞,胶原纤维排列松散。实验组与药物对照组相比,有以下特点: ①毛细血管数量较多; ②毛细血管管腔扩大; ③可见毛细淋巴管;④毛细血管内皮细胞体积较大; ⑤胶原纤维较纤细、松散。在术后第4、8天,实验组的新生毛细血管数量明显高于空白对照组和药物对照组(P<0.01)。见表2。表2 伤后不同时间3组肉芽组织中成纤维细胞及新生毛细血管数的比较(略)

　　2.3 伤口脓液涂片吞噬细胞计数

　　实验组脓液涂片吞噬细胞计数明显高于药物对照组和空白对照组(P<0.01)。见表3。表3 3组创面脓液涂片吞噬细胞计数的比较(略)

　　2.4 不同时间创面愈合率的比较

　　用药后不同时间实验组创面表皮愈合率和肌肉愈合率均明显高于药物对照组(P<0.05)和空白对照组(P<0.01)。见表4、5。表4 3组用药后不同时间创面表皮愈合率的比较(略)表5 3组用药后不同时间肌肉愈合率的比较(略)

　　2.5 创面愈合时间的比较

　　实验组创面愈合时间较药物对照组和空白对照组明显缩短(P<0.01)。见表6。表6 3组创面愈合时间的比较(略)

　　2.6 完整及破损皮肤渗透性急性毒性试验

　　实验25天，实验兔未见死亡，破损皮肤伤口基本愈合，未发现毒副作用。

　　3 讨 论

　　创伤愈合包括炎症反应、肉芽组织形成和组织重建3个不同但又彼此交错的过程。参与皮肤伤口愈合的细胞主要包括各种炎性细胞和组织修复细胞，前者包括中性粒细胞、巨噬细胞、肥大细胞等;后者主要包括血管内皮细胞、表皮细胞和成纤维细胞[3]。成纤维细胞是构成肉芽组织的主要成分之一，在创伤愈合中起着十分重要的作用[4]。吞噬细胞是创伤愈合过程中又一重要的细胞成分，它一方面能清除创面局部受损伤的细胞、坏死组织和病原体;另一方面通过分泌多种细胞因子来调控创伤修复[5]。创伤愈合过程中血管内皮细胞也具有重要作用。创伤后形成的肉芽组织的主要成分是成纤维细胞和毛细血管，新生的毛细血管则是由邻近毛细血管内皮细胞分裂增生演变而来[3]。本实验结果表明，祛腐生肌膏具有较强的促进吞噬细胞、成纤维细胞和毛细血管增殖的作用。

　　肉芽组织具有抗感染、保护创面、机化血凝块、清除坏死组织和异物、填补组织缺损等作用。细胞主要由蛋白质构成，细胞数量增多，组织结构中的蛋白质随之增多，检测肉芽组织的蛋白质含量可初步估计肉芽组织的生长情况。本实验结果显示，实验组肉芽组织细胞中蛋白质含量较对照组高，说明祛腐生肌膏有促进肉芽组织蛋白质合成的作用。

　　创面愈合率、创面愈合时间是最直接而有效的创面愈合评价指标。本实验结果表明，祛腐生肌膏能显著提高创面愈合率，缩短创面愈合时间，促进创面愈合效果较为理想。

　　本实验结果表明，祛腐生肌膏对感染性创面(脓腐未净)同样有促进愈合的作用。理论上说明中医的祛腐生肌、拔脓助长包含了抗感染的作用，在实践中扩大了祛腐生肌膏的适用范围，而且使用方便，价格低廉，毒副作用小，可以在临床上推广使用。

　　【参考文献】

　　[1]徐叔云，卞如濂，陈修. 药理实验方法学[M]. 北京：人民卫生出版社，1991:713.

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