麝鼠香对心肌缺血大鼠ET、CGRP、VEGF的影响

　　【摘要】 目的 探讨麝鼠香(Mrm)对大鼠急性心肌缺血(MI)损伤后期的保护机制。方法 通过结扎大鼠左冠状动脉前降支复制大鼠MI模型。实验动物随机分为6组：假手术组、模型组、阳性对照组、Mrm高、中、低(600、300、150mg·kg-1·d-1)剂量组。通过放免法进行血浆内皮素(ET)、降钙素基因相关肽(CGRP)含量检测，通过免疫组化方法进行血管内皮生长因子(VEGF)表达的检测。结果 与假手术组比较，模型组血浆ET含量增加，CGRP含量减少，心肌VEGF的表达降低(P<0.05或P<0.01);与模型组比较，Mrm高、中剂量组及阳性对照组血浆ET含量减少，CGRP含量增加，心肌VEGF的表达提高(P<0.01或P<0.05)。结论 Mrm 可通过减少血浆ET的释放，增加CGRP的含量，提高心肌VEGF的表达来改善心肌缺血，从而起到一定的保护作用。

　　【关键词】 麝鼠香;心肌缺血;血浆内皮素;降钙素基因相关肽;血管内皮生长因子

　　Study on protection mechanism of Muskrat Musk in myocardial ischemia rats

　　YUAN Ling, et al.(Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, China)

　　[Abstract] Objective To observe the protection mechanism of Muskrat Musk (Mrm) in myocardial ischemia rats.Methods A myocardial infarction model was induced in Wistar rats by left anterior descending artery ligation. Rats with a ligated left anterior descending coronary artery (MI model) were randomly divided into the high, middle and low dose of the Mrm groups, the Dan-shen drop pill (DSP) group and the control group. A sham-operation group was also enrolled in this study. 21 days later, the effect on ET, CGRP and VEGF were observed.Results The content of ET in blood plasma was much lower and of CGRP much higher than that in model control group. The level of VEGF was significantly increased in the area of idiopathic myocardium(P<0.05or P<0.01). Conclusion A certain dose of Mrm can effectively protect rats against myocardial ischemia.

　　[Key words] Muskrat musk; Myocardial ischemia; ET; CGRP; VEGF

　　麝鼠香(Muskrat musk，Mrm)为成年雄性麝鼠(Ondadra zibethica L.)香囊内乳白色分泌物。在回族医药典籍《回回药方》中就有关于麝鼠的记载，称之为“木阿里”[1]。麝鼠香不仅具有与天然麝香相似的气味，而且还含有很多相同或相近的化学成分，如麝香酮(Muscone)、降麝香酮(Normuscone)、大环酮类、肽和氨基酸类等[2]，具有抗炎、镇痛等与天然麝香极为相似的药理作用[3]。谢华生等人[4]发现麝鼠香对大鼠有抗心肌缺血和心动过速作用，本研究拟通过观察麝鼠香对急性心肌缺血损伤后期大鼠血浆内皮素(ET)、降钙素基因相关肽(CGRP)含量的影响及心肌组织血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的变化，探讨其对受损心肌的保护机制。

　　1 材料与方法

　　1.1 动物：健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，体重250-280g，由宁夏医科大学实验动物中心提供。

　　1.2 主要仪器及药品

　　1.2.1 主要仪器:LDZ5-2医用离心机(北京医用离心机厂生产);FJ-2003PS型γ放射免疫记数仪(西安核仪器厂生产);-80℃低温冰箱(日本三洋);BL-2000医学图像分析系统(成都泰盟科技有限公司生产)。

　　1.2.2 药品:麝鼠香(吉林省康乃尔药业，批号：090510);复方丹参滴丸(天津天士力集团，批号：090112);ET 放免试剂盒(解放军总医院技术开发中心放免所，批号：20090609); CGRP 放免试剂盒(解放军总医院技术开发中心放免所，批号：20090609);VEGF 免疫组化试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司，批号：200906)。

　　1.3 方法

　　1.3.1 建立模型:参照文献方法[5]采用结扎左冠状动脉前降支，以结扎处周围心肌变白、搏动减弱且心电图出现ST段弓背向上抬高者为造模成功大鼠。术后给予青霉素20万U/kg，肌肉注射，防止感染。

　　1.3.2 分组及给药：分为假手术组[5]、模型组、阳性对照组、麝鼠香高、中、低剂量组共6组。分组方法：采用随机数字表法，选取10只大鼠作为假手术组(仅将无创性缝合线穿过左冠状动脉而不结扎，其余操作均同造模方法)。术后24h，再选取造模成功大鼠50只，随机分为5组，即模型组、阳性药组、Mrm高、中、低剂量组，每组10只。分组后，各组大鼠灌胃给药。Mrm高、中、低剂量组分别给予浓度为600、300、150mg·kg-1·d-1的Mrm，阳性对照组给予复方丹参滴丸450mg·kg-1·d-1，假手术组、模型组给予等体积的生理盐水，连续给药21d。

　　1.3.3 制备检测标本:给药期结束，每只大鼠记录心电图后，经腹主动脉取血3ml，注入到含有30μl 10%乙二胺四乙酸二钠(EDTA二钠)和40μl抑肽酶的试管中，混匀，低温(4℃)离心机离心(3000rpm)10min，取上清液，以备ET及CGRP检测。取大鼠结扎处心肌缺血区约8mm×8mm×2mm的心肌标本，标记后置于4%甲醛溶液中固定12h，常规石蜡包埋，以备VEGF检测。

　　1.3.4 检测方法:用γ放射免疫记数仪测定ET和CGRP的含量。采用SABC免疫组化方法，检测VEGF的表达水平，利用图像分析系统,以心肌细胞胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性判断标准，在显微镜(×200)下随机选取5个视野，测定其平均光密度，以此代表该组织切片内VEGF的相对含量。

　　1.4 统计学方法:采用SPSS12.0软件进行统计学分析，行单因素方差分析(One-way ANOVA)，P<0.05表示差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 麝鼠香对血浆ET、CGRP含量的影响:与假手术组比较，模型组血浆ET含量明显增加(P<0.01)，CGRP含量明显减少(P<0.01)。与模型组比较，Mrm中、高剂量组及阳性对照组血浆ET含量明显减少(P<0.01或P<0.05)，CGRP含量明显增加(P<0.01或P<0.05)。Mrm中、高剂量组及阳性对照组之间无显著差异[2]。结果见表1。表1 Mrm对急性心肌缺血大鼠血浆ET、CGRP含量的影响注：与假手术组比较, *P<0.01;与模型组比较, #P<0.05, ##P<0.01

　　2.2 麝鼠香对心肌组织VEGF表达的影响:与假手术组比较，模型组心肌VEGF的表达明显降低(P<0.05)(图1、2，见封3);与模型组比较，Mrm中、高剂量组及阳性药组均显著提高心肌VEGF的表达(P<0.01或P<0.05)(图3，见封3)，但三者之间亦无显著性差异[4]。见表2。表2 Mrm对急性心肌缺血大鼠心肌组织VEGF表达的影响

　　3 讨论

　　ET在冠状动脉粥样硬化及缺血性心脏病发生、发展中具有重要作用[6]，现代医学研究表明，在冠心病患者中，动脉管壁的脂质侵蚀损伤血管内皮细胞，导致血管内皮内分泌功能失调，ET含量升高，从而导致冠状动脉的痉挛，促进微小血栓的形成[7];CGRP是目前已知较强的舒血管物质，也是心脏感觉神经的主要神经递质。VEGF又名血管通透因子，主要是通过促血管新生和血管重构而在缺血心肌中建立侧枝循环的[8]。本课题以现代医学对心肌缺血发病机制和损伤机制的认识为基础，观察Mrm对心肌缺血动物模型心肌损伤的保护作用及机制。证实Mrm对心血管系统的确切药效。

　　结果表明：Mrm可能通过减少内源性血管活性物质ET的释放，增加CGRP的含量，提高心肌中VEGF的表达来改善心肌缺血的状况，对大鼠急性心肌缺血后期继发性损伤起到一定的保护作用。

　　【参考文献】

　　[1] 宋岘,主编.回回药方考释[M].北京:中华书局,2000.328

　　[2] 刘科峰,李卓,张慧丽等. 麝鼠香化学成分及药理作用研究[J].长春中医药大学学报,2008,24(2):157

　　[3] 陈心智,邱智东,张永和等. 麝鼠香与麝香抗炎及镇痛作用的比较研究[J].吉林大学学报(医学版),2005,31(3):414-416

　　[4] 谢华生,邓惠影,秦丽梅. 麝鼠香对实验性大鼠急性心肌缺血的影响[J].哈尔滨医药, 2001,21(1):12-13

　　[5] 徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,2006.1052-1054.

　　[6] 李娟,高怀林,贾振华等.中医药保护血管内皮功能的研究进展[J].辽宁中医杂志,2009,(12):2196-2200

　　[7] 初开秋,谭丽娟,张少燕等.冠心病患者血浆同型半胱氨酸和内皮素的相关性研究[J].现代预防医学,2009,(23):4580-4581

　　[8] 王玮,陈玉成,金邻豫.血管内皮细胞生长因子对心肌缺血的实验研究进展[J].中国药师,2005,(4):331-332