盐酸二甲双胍缓释片含量测定的不确定度分析

　　【摘要】 目的：建立盐酸二甲双胍缓释片含量测定的不确定度评定方法。方法：建立盐酸二甲双胍缓释片含量测定不确定度评定数学模型，计算各分量的不确定度，最后计算出合成不确定度。结果：通过量化各分量的相对标准不确定度，计算出合成标准不确定度uc(X)=0.62%，取包含因子k=2(置信概率95%)，得出扩展不确定度U(X)=1.24%。结论：此不确定度评定数学模型适用于紫外-可见分光光度法(对照品法)测定含量时的不确定度评定与报告，可为优化实验方法提供科学依据。

　　【关键词】 盐酸二甲双胍缓释片;含量测定;不确定度评定;紫外-可见分光光度法

　　Assessment of Uncertainty in Determination

　　of Metformin Hydrochloride Sustained-release Tablets

　　An Baiping，et al

　　Zibo Institute for Drug Contro1(Zibo 255000)

　　Abstract：Objective：To establish a method of uncertainty evaluation on the determination of Metformin Hydrochloride Sustained-release Tablets by UV.Methods：To establish the mathematic model of evaluation on uncertainty of the determination of Metformin Hydrochloride Sustained-release Tablets.The independent components of uncertainty of the experiment that effected upon the uncertainty were studied，calculated，and combined.Results：The uncertainty were formulated，Uc(X)=0.62%，U(X)=1.24%(k=2)，confidence probability is 95%.Conclusion：The mathematic model of evaluation on uncertainty was suitable for the determination by UV，the more reliable result of the measurement could be obtained.

　　Key words：Metformin Hydrochloride Sustained-release Tablets;Determination;The evaluation on uncertainty;UV

　　不确定度是表征合理地赋予被测量之值的分散性，与测量结果相联系的参数[1]。在实际工作中，任何测量都会受到随机的和系统的两类因素的影响，这些影响虽然可以在一定的程度上被控制，但是无法完全消除。要想知道测试结果的可靠程度，就需要进行不确定度评定与报告，如果缺乏这样的说明，则在测量结果之间、测量结果与标准或规范中给定的参考值之间都不可能进行比较。笔者根据不确定度的评估指南[2]并且参考其他文献[3，4]，对盐酸二甲双胍缓释片含量测定的不确定度进行分析评定，建立紫外-可见分光光度法(对照品法)测定含量时的一般不确定度评定方法。

　　1 仪器与试药

　　Sartorius CP225D型电子天平(d=0.01mg)，岛津UV-2550型紫外-可见分光光度计，100ml量瓶、5ml移液管均为A等级，水为纯化水，盐酸二甲双胍缓释片(批号：081208规格：0.5g生产厂家：济南东方制药有限公司)，盐酸二甲双胍对照品(批号：100664-200602，生产单位：中国药品生物制品检定所，含量：100.0%)。

　　2 方法[5]

　　取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于盐酸二甲双胍 10mg)，置100ml量瓶中，加水适量，振摇使盐酸二甲双胍溶解，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取105℃干燥至恒重的盐酸二甲双胍对照品约10mg，同上操作，作为对照品溶液。取上述两种溶液，照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版二部附录ⅣA)，在233nm 的波长处测定吸光度，计算，即得。

　　3 不确定度分析

　　3.1 计算公式和数学模型

　　样品中盐酸二甲双胍含量计算公式：X=A样品×W对照V1×V2V3×W平均A对照×W样品V4×V5V6×标示量×100%(1)其中：X—样品中盐酸二甲双胍的标示含量，%，A样品，A对照—供试品溶液，对照品溶液的吸光度，W样品，W对照—称取供试品，对照品的质量，g，V1，V4—供试品，对照品的溶解定容体积，100ml，V3，V6—供试品，对照品的续滤液定容体积，100ml，V2，V5—供试品，对照品的续滤液移取体积，5ml，W平均—供试品的平均片重，g，标示量—供试品的标示规格，常量。

　　不确定度的来源：①随机因素主要有天平称量的重复性、非线性和可读性，样品研细后取样的不均匀性，紫外-可见分光光度计测量的重复性，定容时判断量瓶刻度线与液面齐平的重复性，精密取样时判断移液管刻度线与液面齐平的重复性，样品溶解温度和时间的差异，环境的变动性以及每次操作差异等。②非随机因素主要有天平的校准、灵敏度，量瓶的校准和量瓶使用温度与校准温度的不同，移液管的校准和移液管使用温度与校准温度的不同，紫外-可见分光光度计的校准，对照品的含量的不确定度，平均片重的差异等。因为在日常实验中，平行测试2份的样品均取自20片的研磨细粉中，因此对于这20片总的取样差异，通过平行测试无法减小，所以在日常实验中平均片重为非随机因素。对照品的含量因为缺少必要的信息，在此忽略考察。

　　计算公式(1)是从测量原理给出的，显然，没有考虑各种随机因素对不确定度的影响，在此应引入反映各方面随机影响的重复性系数frep，其数值等于1。重复性系数frep的相对标准不确定度等于结果的合成重复性不确定度分量。在随后不确定度分量的评定中，不需再单独考虑各个随机影响。

　　评定不确定度的数学模型应写成如下形式：X=A样品×W对照V1×V2V3×W平均A对照×W样品V4×V5V6×标示量×frep×100%(1)

　　3.2 各分量标准不确定度的评估

　　3.2.1 测量重复性标准不确定度

　　称取同一批次供试品8份，同时进行前处理，之后测定含量，结果如下：95.53%，96.74%，95.85%，94.95%，95.74%，96.33%，95.17%，96.08%。次测量的实验标准偏差按下式计算：s(X)=Σni=1(Xi-X)2n-1=0.00591在日常的分析中，测量两份样品，报告平均值。两次测量结果平均值的相对标准偏差为：u(frep)=s(X)X2=0.00436

　　3.2.2 平均片重W平均引起的相对标准不确定度：①来自于天平校准引入的标准不确定度u1，所用电子天平的检定证书给出的最大允差为±0.0002g，假定为均匀分布，则u1=0.0002/3=0.00012g。②来自于供试品的不均匀引入的标准不确定度u2，根据20片供试品的称量数据，由贝塞尔公式得u2=0.01112g，则供试品单片的质量标准不确定度u=u21+u22=0.01112g。所以供试品平均片重的相对标准不确定度urel(W平均)= u/(W平均×20)=0.00292。

　　3.2.3 称取供试品的质量W样品引起的相对标准不确定度：称量的重复性已经通过测量重复性予以考量[6]，因此此项主要来自于天平校准引入的标准不确定度，由于采用减重法称量，按照“精简(抵偿)”原则，同一台天平两次称量的校准偏差可以相互抵消，不予考虑。

　　3.2.4 称取对照品的质量W对照引起的相对标准不确定度：同3.2.3的分析，也不与考虑。

　　3.2.5 供试品溶解定容体积V1引起的相对标准不确定度：①来自于量瓶校准引入的标准不确定度u1(V1)，根据《常用玻璃量器检定规程》JJG196-1990规定，A等级的100ml量瓶的允差为±0.10ml，属于B类不确定度。且并未提供其他的信息。但在一个有效的生产过程中标定值比极限值出现的可能性更高。则此时按三角分布计算优于矩形分布，标准不确定度u1(V1)=0.10/6=0.0408ml。②来自于温度变动引入的标准不确定度u2(V1)，由制造商提供的信息，该容量瓶在20℃校准，而本实验室温度在(20±7)℃范围内变化近似为矩形分布，属于B类不确定度。水的膨胀系数为2.1×10-4/℃，标准不确定度u2(V1)=100×7×2.1×10-4/=0.0849ml。所以urel(V1)=u21(V1)+u22(V1)/100=0.00094。

　　3.2.6 供试品续滤液定容体积V3引起的相对标准不确定度：分析过程同3.2.5，结果也相同，所以urel(V3)=0.00094。

　　3.2.7 供试品续滤液移取体积V2引起的相对标准不确定度：①来自于移液管校准引入的标准不确定度u1(V2)，A等级的5ml移液管的允差为±0.015ml，属于B类不确定度。按三角分布计算，标准不确定度u1(V2)=0.015/6=0.0061ml。②来自于温度变动引入的标准不确定度u2(V2)，由制造商提供的信息，该移液管在20℃校准，而本实验室温度在(20±7)℃范围内变化近似为矩形分布，属于B类不确定度。水的膨胀系数为2.1×10-4/℃，标准不确定度u2(V2)=5×7×2.1×10-4/3=0.0042ml。所以urel(V2)=u21(V2)+u22(V2)/5=0.00148。

　　3.2.8 对照品溶解定容体积V4引起的相对标准不确定度：分析过程同3.2.5，结果也相同，所以urel(V4)=0.00094。

　　3.2.9 对照品续滤液定容体积V6引起的相对标准不确定度：分析过程同3.2.5，结果也相同，所以urel(V6)=0.00094。

　　3.2.10 对照品续滤液移取体积V5引起的相对标准不确定度：分析过程同3.2.7，结果也相同，所以urel(V5)= 0.00148。

　　3.2.11 供试品溶液吸光度引起的相对标准不确定度：该项主要由紫外-可见分光光度计的校准引入，由于本实验采用对照品法，使用仪器为同一台紫外-可见分光光度计，可以有效的抵消校准影响，所以该项忽略不计。

　　3.2.12 对照品溶液吸光度引起的相对标准不确定度：分析过程同3.2.11，同样忽略不计。

　　3.2.13 标准曲线引起的相对标准不确定：标准方法规定使用单点校准，有理由相信在测量给定的范围内吸光度与浓度之间有通过零点的线性关系，这里只要考虑斜率的随机性给测量结果带来的系统影响，因此采用斜率的不确定度衡量对测量结果的不确定度的贡献。取5份对照品，依法操作，测定吸光度，结果如表1：表1 对照品溶液浓度与吸光度结果表

　　3.3 合成标准不确定度

　　3.3.1 上述实验步骤中，各项不确定度的分量见表2表2 紫外-可见分光光度法测定盐酸二甲双胍缓释片

　　3.3.2 合成标准不确定度表2中各不确定度的分量，以相对标准不确定度的平方和进行合成，得合成标准不确定度

　　3.4 扩展不确定度取包含因子k=2，置信概率为95%，扩展不确定度：　U(X)= kuc(X)=2×0.62%=1.24%

　　3.5 报告不确定度按照国家标准使用紫外-可见分光光度法测定盐酸二甲双胍缓释片含量，平行测试2份样品取平均值报告结果。取包含因子k=2，置信概率为95%时，检测结果可表示为标示含量X=95.80%±1.24%。

　　4 讨论

　　4.1 评估不确定度的严密程度以满足实际应用需要的前提，避免不必要的繁琐是合理的，一是使用简化的评估方法，二是忽略微小分量。根据小分量不确定度不足最大分量不确定度的1/3时，小分量不确定度可以忽略不计的原则，由以上的评定结果可以看出。本方法测定结果的不确定度大小主要取决于测量重复性，片剂平均片重的随机性，校正曲线斜率的随机性以及移液管体积的不确定度。为了降低本方法的不确定度值大小，提供测定结果的可靠性，可通过以下途径：① 严格控制实验条件，熟练并且规范实验操作;② 企业改进工艺，减小片剂的不均一性;③ 选择精度较好的移液管及容量瓶和紫外-可见分光光度计。

　　4.2 如果质量体系是稳定的，不确定度的估计值能可靠地适用于以后该实验室使用该方法所得到的结果中，并不需要在每次测量后重复评估不确定度。这里的质量体系的稳定指的是与此次不确定度的评估过程具有相同或者近似的体系和其它未考虑因素，其中比如对照品含量，人员素质，试剂纯度，仪器状态，环境条件等。

　　【参考文献】

　　[1] 中国计量科学研究院.JJF1059-1999《测量不确定度评定与表示》[S].1999：1571.

　　[2] 中国合格评定国家认可委员会.化学分析中不确定度的评估指南[S].2006：7.

　　[3] 严华，张萍，程显龙等.紫外分光光度法测定沙棘中总黄酮含量的不确定度评定[J].中国药事，2009，23(4)：339.

　　[4] 李会轻，庞靖.紫外-可见分光光度法测定维生素B1片含量的不确定度分析[J].齐鲁药事，2009，28(5)：276.

　　[5] 国家食品药品监督管理局标准YBH31132005[S].

　　[6] 李欣，魏凯.药品检验中滴定液标定的不确定度的评估[J].黑龙江医药，2009，22(3)：291.