注射用头孢米诺钠无菌检查方法的验证

　　【摘要】 目的：建立注射用头孢米诺钠无菌检查方法。方法：参照中国药典2005年版二部附录XIH进行试验。结果：采用薄膜过滤法，以0.1%无菌蛋白胨水溶液为冲洗液，选择冲洗量为500ml，即可消除样品对各菌株的抗菌活性。结论：故注射用头孢米诺钠可按照此方法进行无菌检查。

　　【关键词】 注射用头孢米诺钠;无菌检查;薄膜过滤法

　　Sterility Test Method Validation of Cefminox Sodium for Injection

　　He Liqun，et al

　　Harbin Gloria Pharmaceuticals Co.，Ltd(Harbin 150025)

　　Abstract：Objective：To establish a Sterility test method of Cefminox Sodium for Injection.Methods：To test according to Chinese pharmacopoeia 2005 edition appendix XIH.Results：The antibacterial activity of various sample strains can be eliminated with membrane filtration method，500ml 0.1% sterile peptone aqueous solution as flushing fliud.Conclusion：This method can be used as the sterility test method for Cefminox Sodium for Injection.

　　Key words：Cefminox Sodium for Injection，sterility test，membrane filtration method

　　注射用头孢米诺钠对革兰氏阳性、革兰氏阴性菌具有广谱抗菌活性，特别对大肠杆菌、克雷伯菌、流感嗜血杆菌、变形杆菌属及脆弱拟杆菌有很强的抗菌作用。笔者对注射用头孢米诺钠的无菌检查进行了实验摸索，结果：采用薄膜过滤法，以0.1%无菌蛋白胨水溶液为冲洗液，选择冲洗量为500ml，即可消除样品对各菌株的抗菌活性。

　　为了保证药品的质量，需要对其无菌情况进行控制。根据《中国药典》2005 年版的要求，对注射用头孢米诺钠的无菌检查的方法进行了验证。

　　1 试验材料

　　1.1 仪器　HTY-2000A薄膜过滤器，一次性使用的全封闭三联集菌培养器　杭州泰林科技有限公司。

　　1.2 试剂　氯化钠(分析纯)，上海化学试剂厂。

　　1.3 培养基硫乙醇酸盐液体培养基 批号0608162改良马丁培养基 批号070105营养肉汤培养基 批号070110营养琼脂培养基 批号61121　　玫瑰红钠琼脂培养基 批号050711以上培养基均由中检所提供。

　　1.4 试验用菌株名称及其编号菌株名称菌种编号编号金黄色葡萄球菌CMCC(B)2600326003-41铜绿假单胞菌CMCC(B)1010410104-41生孢梭菌CMCC(B)6494164941-41枯草芽孢杆菌CMCC(B)6350163501-41白色念珠菌CMCC(F)9800198001-41黑曲霉CMCC(F)9800398003-41

　　1.5 样品　 注射用头孢米诺钠 规格：0.5 g，数量：160瓶/批×3批批号：070424 070426 070428

　　2 方法和结果

　　2.1 菌液制备

　　取经30～35℃培养18～24小时的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌营养肉汤培养物1ml分别加入9ml 0.9%的氯化钠溶液中，10倍依次稀释，金黄色葡萄球菌至10-6，铜绿假单胞菌、大肠埃希菌至10-7，枯草芽孢杆菌至10-5，约为10～100cfu/ml，备用。取经30～35℃培养18～24小时的生孢梭菌硫乙醇酸盐液体培养物1ml，加入9ml 0.9%的氯化钠溶液中，10倍稀释至10-7，约为10～100cfu/ml备用。取经23～28℃培养24～48小时的白色念珠菌真菌液体培养物1ml，加入9ml 0.9%的氯化钠溶液中，10倍稀释至10-5，约为10～100cfu/ml备用。取经培养5～7天的黑曲霉改良马丁琼脂斜面培养物，加入3ml 0.9%的氯化钠溶液，洗下孢子转移至另一试管，取1ml加入9ml 0.9%的氯化钠溶液中，10倍稀释至10-4，约为10～100cfu/ml备用。

　　2.2 菌液计数　分别取上述5 种细菌菌液1mL 加入培养皿，每种菌液做平行2 皿。注入营养琼脂约18mL，30～ 35℃培养(生孢梭菌置厌氧培养箱中培养)。分别取上述两种真菌菌液1mL 加入培养皿，每种菌液做平行2 皿。注入琥红琼脂约18mL。23～ 28℃培养。活菌计数结果(见表1)。表1 活菌计数

　　2.3 培养基的灵敏度和无菌检查

　　2.3.1 取装量12mL 的硫乙醇酸盐流体培养基8 管，分别接种金黄色葡萄球菌、生孢梭菌各3 管，每管接种量为1mL(含10～ 100cfu·mL-1);余下2 管不接种做对照(培养基无菌检查用)。

　　2.3.2 取装量9mL 的液体真菌培养基4 管，接种白色念珠菌3 管，每管接种量为1mL(含10～ 100cfu·mL-1);余下1 管不接种做对照(培养基无菌检查用)。

　　2.3.3 各管置规定的温度培养5d，逐日记录结果，每株菌接种后的培养基，呈现生长;对照澄清无菌生长(见表2)。表2 培养基的灵敏度和无菌检查

　　3 结果

　　3.1 从表1 可以看出，菌悬液计数均在10～ 100cfu/mL

　　3.2 从表2 可以看出，培养基灵敏度和无菌检查符合要求。

　　3.3 从表3、4、5 可以看出　注射用头孢米诺钠的无菌检查，阳性对照菌24h 内全部正常生长，阴性对照及样品澄清无菌生长，试验组检出试验菌，可采用薄膜过滤法，用0.1%的蛋白胨水冲洗，冲洗量500mL，每次50mL，每次用力振摇。

　　讨论

　　4.1 注射用头孢米诺钠对革兰氏阳性、革兰氏阴性菌具有广谱抗菌活性，特别对大肠杆菌、克雷伯菌、流感嗜血杆菌、变形杆菌属及脆弱拟杆菌有很强的抗菌作用。笔者对注射用头孢米诺钠的无菌检查进行了实验摸索，结果：采用薄膜过滤法，以0.1%无菌蛋白胨水溶液为冲洗液，选择冲洗量为500ml，即可消除样品对各菌株的抗菌活性[2]。

　　4.2 阳性对照菌的加入方式，2005 年版《中国药典》没有明确指出，目前各检验单位采用：供试品过滤且冲洗完成后，将菌液直接加入培养基。而在国际调和修正案的无菌方法中指出在冲洗滤膜的最后阶段，将菌液加入含有少量的冲洗液的滤器中，过滤后再加入培养基，这样就减少了由于滤膜的质量问题而引起的漏检[3]。

　　【参考文献】

　　[1] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典[S].2005 年版二部.北京：化学工业出版社，2005，

　　[2] 汪穗福.微生物检测验证技术[M].北京：中国医药科技出版，2005，

　　[3] 潘友文.现代医药工业微生物实验质量管理与验证技术[M].北京：中国协和医科大学出版，2004，