烫伤合剂的无菌检查方法验证

　　【摘要】 目的：建立烫伤合剂无菌检查方法。方法：采用离心加薄膜过滤法，并根据《中国药典》(2005年版一部)进行验证。结果：经试验各试验菌能够正常生长。结论：烫伤合剂的无菌检查可使用离心加薄膜过滤法。

　　【关键词】 烫伤合剂;无菌检查;薄膜过滤法

　　Verification of Sterility Test for Tangshang Mixture

　　Li Mingyan1，et al

　　1.The 4th Affiliated Hospital of Guangxi Medical University(Guangxi Liuzhou 545005)

　　Abstract：Objective：To establish a method of sterility test for Tangshang Mixture.Methods：Centrifugation and film filtration method was used and verified on the basis of CP2005.Results：After test，each experimental microorganism can normally grow up.Conclusion：The sterility test for Tangshang Mixture can adopt centrifugation and film filtration method.

　　Key words：Tangshang Mixture;sterility test;verification

　　烫伤合剂是本院制剂，含有虎仗，两面针，十大功劳，地榆等，有清热解毒，消肿止痛的功效，用于水火烫伤，临床疗效显著[1]。根据《中国药典》2005年版一部的微生物限度标准，要求符合无菌检查法规定[2]。为了确保药品质量，本实验建立了烫伤合剂的无菌检查方法并对其进行了验证。

　　1 仪器与材料

　　1.1 仪器 LD4-2低速离心机(北京医用离心机厂);电热恒温水浴箱(上海医疗器械七厂);YX280B手提式不锈钢蒸汽消毒器(上海三中医疗器械有限公司);LRH-150B-生化培养箱(广东省医疗厂);PYX-DHS-35X40隔水式电热培养箱;STV6开放式无菌薄膜过滤器(浙江宁海白石药检仪器厂)。

　　1.2 药品与试剂

　　烫伤合剂(柳州市工人医院制剂室，批号：20090723，20092811，20080915)，硫乙醇酸盐流体培养基(批号090730)，改良马丁培养基(批号060122)，营养肉汤培养基(批号030925)，营养琼脂培养基(批号既090730)，玫瑰红钠培养基(090730)均由杭州天和微生物试剂有限公司提供，灵敏度均符合药典要求。稀释剂0.9%灭菌氯化钠溶液(自配)，冲洗剂0.1%蛋白胨缓冲液(自配)。

　　1.3 试验用菌株

　　金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]、生孢梭菌[CMCC(B)64941]、白色念珠菌[CMCC(F)98001]、黑曲霉[CMCC(F)98003](均由广西食品药品检验所提供)。

　　2 方法与结果

　　2.1 菌液制备按照《中国药典》2005版一部附录无菌检查法菌液制备项下方法，制成0～100cfu的菌悬液。

　　2.2 供试液的制备先取供试品原液10mL500r/min离心5min，取上清液作为供试液。

　　2.3 方法验证试验取灭菌好的滤器，先用适量冲洗液(0.1%蛋白胨水溶液)润湿滤膜，然后将供试液按薄膜过滤法过滤，再用冲洗液100ml/次，冲洗三次，在最后一次冲洗液中加入小于100cfu的菌液，过滤。取出滤膜接种至相应的100ml中，作为供试品组;另取滤器，不过滤供试液，其他操作同上，作为阳性对照;各试验菌及相应的培养基逐一进行验证，并将加入的阳性菌液做平板计数;再取两个滤器，过滤供试液，不加菌液，同法冲洗，取出滤膜分别放入两种培养基中作为供试品阴性对照;再取两个滤器，不加供试液，不加菌液，同法冲洗，取滤膜放入两种培养基中作为冲洗液阴性对照。金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌加入硫乙醇酸盐流体培养基中在30～35℃，白色念珠菌、黑曲霉加入改良马丁培养基中在23～28℃培养5天，逐日观察并记录结果。

　　2.4 验证试验结果见表1表1 方法验证试验结果烫伤合剂的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，可以照此检验方法和检验条件进行供试品的无菌检查。

　　2.5 烫伤合剂无菌检查取三个批号的烫伤合剂，分别照上述方法，取10ml先离心再薄膜过滤，冲洗完毕后通过无菌操作将滤膜剪成三份，加入装有硫乙醇酸盐和改良马丁培养基各50mL的无菌容器中，其中一份加入小于100cfu的金黄色葡萄球菌做阳性对照，冲洗液阴性对照管的制备同方法学验证实验中的阴性对照。上述样品组及对照组按规定温度培养14d，每天观察并记录结果，结果如表2。表2 烫伤合剂无菌检查结果

　　3 讨论

　　3.1 在开始进行方法验证时首先做了直接接种法的预试验，实验证明，烫伤合剂有较强的抑菌作用，与只加菌液的阳性对照管相比，供试品加菌液的样品管中的试验菌明显生长缓慢，尤其是金黄色葡萄球菌。这与烫伤合剂中含有抑菌性较强的中药成分金银花、地榆、两面针等有关[3-4]。因此，直接接种法不适于烫伤合剂的无菌检查，应选用薄膜过滤法。

　　3.2 烫伤合剂是由多味中药煎煮而得，药品中有些许沉淀，直接接种法会影响观察结果，而薄膜过滤时容易阻塞微孔滤膜，因此需要对样品进行预处理，低速离心除去药渣，取上清液作为供试液。

　　【参考文献】

　　[1] 肖萍.烫伤合剂的制备及疗效观察[J].时珍国医国药，2007，18(3)：655-658.

　　[2] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典(一部)[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：附录68。

　　[3] 高尚进，毛艳，周汉东，等.11种中草药对8种常见细菌的体外抑菌试验[J].川北医学院学报，2008，23(5)：466-468.

　　[4] 赵良忠，蒋贤育，段林东，等.金银花水溶性抗菌物质的提取及其抑菌效果研究[J].中国生物制品学杂志，2006，19(2)：201-203.