宫颈癌患者血清HGF水平及其组织中受体c-Met表达的临床意义

　　【摘要】 目的 探讨血清肝细胞生长因子(HGF)水平及其受体c-Met在宫颈癌中的表达。方法 采用酶联免疫吸附法(ELLSA)及免疫组化法测定15例正常宫颈、12例CINⅠ- Ⅱ及15例CINⅢ、71例宫颈浸润癌患者血清HGF的含量及其组织c-Met受体的表达。结果 宫颈浸润癌血清HGF平均浓度为458 pg/ml，显著高于正常宫颈175 pg/ml、 CINⅠ- Ⅱ168 pg/ml 、CIN Ⅲ245 pg/ml (P均<0.05);宫颈浸润癌组织c-Met受体阳性率为52.1%显著高于正常宫颈及CIN(P<0.05)，宫颈癌患者血清HGF水平与其组织中c-Met表达阳性率成正相关。 结论 宫颈癌血清HGF水平及其组织c-Met阳性表达增高可能是宫颈癌发生发展及侵袭的重要因素，HGF/c-Met联合检测可能成为宫颈癌诊断的指标。

　　【关键词】 宫颈癌;肝细胞生长因子;c-Met

　　The clinical research of serum levels HGF and expression of its receptor c-Met in cervical cancer

　　ZHANG Xue-yu, et al. (The Affiliated Hospital of Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, China)

　　[Abstract] Objective To investigate the serum content of HGF and the expression of c-Met in cervical cancer.Methods Levels of the serum HGF was determined by Elsa and expression of c-Met was determined by immunohistochemistry in 15 cases with normal cervix, 12 cases CINⅠand CINⅡ, 15 cases CIN Ⅲ and 71 cases cervical cancer.Results The concentration of serum HGF in cervical cancer which was 458 pg/ml was significantly higher than normal cervix and CIN (P<0.05). Expression of c-Met in cervical cancer which was 52.1% was higher than that in normal cervix and CIN (P<0.05). The relation of the levels of the serum HGF and the expression of c-Met in cervical cancer is positive (P<0.05). Conclusions HGF/c-Met may become a diagnosis target of cervical cancer. The higher serum content of HGF and positive expression of c-Met may play important role in infiltrating and the transfer process of cervical cancer.

　　[Key words] Cervical cancer; HGF;c-Met

　　肝细胞生长因子(HGF)是一种具有刺激多种类型细胞的增殖、分化、形态发生和侵袭运动的多肽生长因子，其受体c-Met为原癌基因的表达产物。HGF/c-Met(肝细胞生长因子及其受体)在多种组织中均存在表达，HGF作用于受体c-Met,形成了HGF/c-Met信号转导系统,它的高表达刺激多种肿瘤细胞的分裂、增殖、运动、离散。近年大量研究表明，HGF/c-Met在许多恶性肿瘤的发生、发展中起重要作用。本研究采用酶联免疫吸附法(ELLSA)及免疫组化法测定正常宫颈人群、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)及宫颈癌患者外周血HGF的含量及其组织中c-Met受体的表达情况，探讨HGF/c-Met在宫颈癌发生发展中的作用。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料:收集宁夏医科大学附属医院妇科2007年4月-2008年2月经病理证实的113例同一患者的血清及石蜡标本，其中CINⅠ- Ⅱ12例，CINⅢ15例，宫颈癌Ⅰ期20例，Ⅱ期37例(ⅡA期28例，ⅡB期9例)，Ⅲ+Ⅳ期14例，正常宫颈15例作为对照(均为因子宫肌瘤切除子宫的患者)。年龄26-70岁，平均47岁;对照组年龄为32-65岁，平均为45岁(P>0.05)。宫颈癌Ⅰ期及ⅡA期患者48例广泛子宫切除加盆腔淋巴结清扫术，所有患者在收集血标本及组织标本前未接受任何辅助治疗。

　　1.2 方法

　　1.2.1 标本采集:空腹抽取静脉血5ml, 于4 ℃3000r/min 离心15 min ,取血清1ml分装后置-80℃深低温冰箱冻存备用。采集同一患者的宫颈组织，制备蜡块。

　　1.2.2 血清HGF水平测定:采用酶联免疫吸附试实验(ELISA)双抗体夹心法，试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司，编号EK0369。操作步骤严格按试剂盒说明书进行。以450nm波长读光密度值，绘制标准曲线，计算出各样本HGF浓度。

　　1.2.3 组织中c-Met受体的表达:采用免疫组织化学染色法(EnVision两步法)，一抗为Rabbit Anti-Hepatocyte growth factor receptor(c-Met),购自武汉博士德公司，编号为BA0468。即用型快速免疫组化MaxVisionTM试剂盒(兔)及DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物公司，编号为KIT-5004、DAB-0031。操作步骤严格按试剂盒说明书进行。结果判断为c-Met定位于细胞胞浆及细胞膜，少部分间质着色,着色为棕黄色。2名病理医师双盲法观察切片，具体标准为选择具有代表性的10个高倍视野进行观察记数，每个视野记数100个细胞。根据染色程度和染色细胞百分率进行评分：基本不着色为0分，着色淡为1分，着色适中为2分，着色深为3分;着色细胞占记数细胞的百分率≤5%为0分，6%-25%为1分，26%-50%为2分，≥51%为3分。将每张切片平均着色程度得分与平均着色细胞百分率得分各自相乘为其最后得分：≤1分为阴性(-)，2-3分为(+)，4-6分为(++)，>6分为(+++)。弱阳性表达指(+)，强阳性表达指≥(++)，阴性表达为(-)[1]。

　　1.3 统计学方法：用SPSS 11.5软件进行统计学处理，比较采用独立样本t检验、方差分析，阳性率的比较用χ2检验， 两变量相关分析采用等级相关Spearman检验。

　　2 结果

　　2.1 各组血清HGF的浓度:正常宫颈、CIN及宫颈癌组间方差分析(F=71.554，P<0.05)，有统计学意义。宫颈癌的血清HGF平均浓度485pg/ml显著高于正常宫颈(P<0.05)，也显著高于CINⅠ-Ⅱ和CIN Ⅲ (P<0.05)。正常宫颈和CINⅠ-Ⅱ血清HGF水平无明显差异(P>0.05)，见表1。宫颈癌Ⅰ期的平均血清HGF为383pg/ml，Ⅱ期为473pg/ml，Ⅲ+Ⅳ期为595pg/ml，随临床期别的增加血清HGF水平也随之增加，各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。表1 各组血清HGF浓度的比较

　　2.2 宫颈组织c-Met的表达:宫颈癌组织c-Met受体阳性率为52.1%，显著高于正常宫颈和 CIN(χ2=18.931,P=0.000)，见表2。随着宫颈癌的分期升高组织中c-Met的表达也随之升高(χ2=10.261,P=0.006)，见表3、图1-4(封二)。表2 c-Met在不同宫颈组织中的表达表3 c-Met在宫颈癌不同临床分期的表达

　　2.3 宫颈癌血清HGF水平与组织中c一Met阳性表达的关系:采用等级相关Spearman检验，相关系数r=0.604，P=0.000，宫颈癌患者血清HGF水平与其组织中c-Met表达的阳性率成正相关。

　　3 讨论

　　HGF/c-Met表达增高与肿瘤的发生、发展关系密切，其可能的作用机理为HGF与其受体c-Met结合并启动该受体酪氨酸激酶的活性,通过诱导黏附因子的启动以及细胞外基质ECM的降解及促进肿瘤细胞的运动和血管的生成，最终参与肿瘤细胞的增殖、分化、形态发生及浸润等过程的调节[2]。本研究测定宫颈癌的血清HGF平均浓度显著高于正常宫颈和CIN(P<0.05)，血清HGF浓度随宫颈癌临床期别的升高呈上升趋势(P<0.05)。有研究表明，HGF在乳腺癌、直肠癌、胃癌等恶性肿瘤体液中显著升高[3-5], 并与侵袭状态息息相关,与本研究结果一致，提示HGF参与了宫颈癌的发生发展、侵袭及转移。本研究还发现正常宫颈血清HGF水平与CINⅠ-Ⅱ间无差异，说明CINⅠ-Ⅱ仅仅是一个癌前期病变，大部分可以消退或逆转，与宫颈癌还有差别，考虑可能与此时期HGF/c-Met信号传导通路未被启动有关。宫颈癌血清HGF水平显著高于正常宫颈，并随宫颈癌患者临床期别的升高而增高，提示血清HGF水平判断宫颈癌的病情的一个血清学指标。

　　本研究结果显示，宫颈浸润癌组织c-Met受体阳性率为52.1%，显著高于正常宫颈的6.7%、CINⅠ-Ⅱ8.3%及CIN Ⅲ20%，随着宫颈癌的分期升高组织中c-Met的表达也随之升高。本研究结果与Baykal[6]等研究结果相近，进一步说明血清HGF及其受体c-Met的关联性。肿瘤细胞丰富的c-Met受体可能是通过与旁分泌和自分泌途径获得的HGF结合而在宫颈癌浸润和转移过程中发挥重要作用[7]，c-Met高表达与宫颈癌的发生发展有直接关系，也是宫颈癌严重程度的一个组织学指标。

　　本实验患者血清HGF水平与其受体c-Met表达做Spearman检验，相关系数r=0.604(P<0.05)，存在正相关，说明在宫颈癌组织中c-Met蛋白的表达随血清HGF浓度的增加而增加，癌细胞的增殖与迁移是肿瘤发生浸润与转移的重要前提，而HGF /c-Met这一对特殊生长因子和受体在宫颈癌中呈现高表达，是宫颈肿瘤细胞侵袭和迁移能力增加的因素。由于组织细胞c-Met蛋白异常高表达，导致其对HGF敏感性增强，从而促使该细胞过度增殖、分化乃至恶化，导致宫颈组织的恶变。

　　综上所述，宫颈癌血清HGF水平升高，其组织c-Met的过表达是宫颈癌发生发展的因素;HGF/c-Met这一过表达的复合物在宫颈癌的发生发展中起了关键的作用，参与了宫颈癌的侵袭与转移。因此，血清HGF水平升高、宫颈组织c-Met阳性表达可能成为宫颈癌诊断和判断宫颈癌预后的实验指标。

　　【参考文献】

　　[1] 江忠清.宫颈癌MMP-9表达与肿瘤血管生成.癌细胞增殖及侵袭转移的关系[J].癌症,2003，22(2)：178.

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　　[6] Baykal C,Ayham A,Al A,et al.Overexpression of the c-Met/HGF receptor and its prognostic significance in uterine cerrix carcinomas[J].Gynecol Oncol,2003,88(2):123-129.

　　[7] Leo C,Hom LG,Einenkel J,et al.Tumor hypoxia and expression of c-Met in cervical cancer [J].Gynecol Oncol,2007,104(1):181-185.