高效液相色谱法测定祛痰止咳合剂中黄芩苷的含量

　　【摘要】 目的：建立祛痰止咳合剂的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱(HPLC)法测定祛痰止咳剂中黄芩苷的含量。结果： HPLC法测得本品中黄芩苷的含量为0.512～0.541mg/ml，在0.40～2.00μg的范围内，溶液的浓度与峰面积呈良好的线形关系， r = 0.9993， 加样平均回收率为99.85%(n=5)，RSD为0.69% 。结论：本品定量方法简便、准确，专属性强能够控制该制剂的内在质量。

　　【关键词】 祛痰止咳剂 高效液相色谱法 含量测定 黄芩苷

　　Determination of Baicalin in Qutanzhike Mixture by HPLC

　　Fu Lingyan Cheng Xiaoying Zhao Minghui

　　(Jilin Institute for Food and Drug Control Jilin Jilin 132001,P.R.China)

　　【Abstract Objective】Study on the Quality Standarded for Qutanzhike Mixture. Method: Radix Scutellariae, Flos Lonicerae in Qutanzhike Mixture were identified by TLC,and the content of Baicalin was determined by HPLC. Result: The Baicalin showed a good linear relationship within a range of 0.40～2.00ug(r=0.9993), the average recovery was 99.96%(n=5), RSD=1.37% . Conclusion: method HPLC is accurate and reliable method.The quality standard can be used for quality control of this product.

　　【Key words】Qutanzhike Mixture HPLC Baicalin determination

　　祛痰止咳合剂是由黄芩、苦杏仁、甘草、瓜蒌仁等药物组成。该方是在大量临床实践的基础上，以中医辨证为主，结合现代医学及现代药理研制出的治疗急、慢性气管炎的有效药物。为更好地控制其质量，保证该制剂的临床疗效，本研究采用HPLC法对制剂中的主要有效成分黄芩苷进行了含量测定，现报道如下。

　　1 实验材料

　　1.1 仪器 LC-2010A 高效液相色谱仪，CLASS-VP色谱工作站，UV-2401型紫外分光光度仪(日本岛津)。

　　1.2 试药 黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110715-200212);祛痰止咳合剂(吉林市船营区中医院制剂室);甲醇为色谱纯;其余试剂均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件与系统适应性试验 色谱柱：DiamosilTM(钻石)C18(5μ 250×4.6mm，);流动相：甲醇-水-冰醋酸 (45：55：1);检测波长：276nm;流速：1.0ml/min;柱温：室温(25℃);进样量：对照品溶液6μl，样品溶液10μl;理论塔板数按黄芩苷峰计应不低于1500。

　　2.2 溶液的制备

　　2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取在60℃减压干燥4h的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。

　　2.2.2 供试品溶液的制备 精密量取本品10ml，置50ml容量瓶中，加60%甲醇适量，超声(功率250W)处理20分钟，放置至室温，加60%甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

　　2.2.3 阴性对照溶液的制备 取除黄芩以外的处方中其余药材的十分之一量，按法制成合剂，再按供试品制备方法，制成阴性对照溶液。

　　2.3 专属性试验

　　分别精密吸取供试品溶液、阴性对照溶液10μl，对照品溶液6μl，注入液相色谱仪，记录色谱图(图1)。从图中可见，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间(30.8min)的色谱峰，阴性试验无干扰，证明本法可行。

　　2.4 线性关系考察 精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml约含0.1mg的溶液，分别精密量取对照品溶液4、8、12、16、20μl，进样测定，以浓度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，得回归方程为 Y=1151340.8+100157.4 X，r =0.9993，线性范围0.40～2.00μg。

　　2.5 精密度和稳定性试验 取样品(批号：050517)按“2.2.2 供试品溶液的制备”方法制备样品溶液，重复进样5次，进样量10μl，其峰面积的相对标准偏差(RSD)为0.9%，表明精密度较好。取同一样品溶液，在0、2、4、10、24h分别进样测定，结果5

　　次测得值(黄芩苷，mg/ml)的RSD为1.3%，可见黄芩苷在24h内稳定。

　　2.6 重现性试验 取供试品(批号：050517)，共5份，分别按“2.2.2 供试品溶液的制备”方法制备样品溶液，进行测定，其黄芩苷含量的RSD为0.7%，表明重现性较好。

　　2.7 加样回收率试验 精密量取已知含量的样品(批号：050516，含量为0.529mg/ml)适量，共5份，分别定量加入黄芩苷对照品适量，按“2.2.2 供试品溶液的制备”方法操作，得回收率试验溶液，依法测定，结果见表1。

　　2.8 供试品的测定及限度制定 取多批供试品，照正文所述方法测定黄芩苷的含量，结果各批样品中黄芩苷的含量均高于0.50mg/ml，暂定为本品每1ml含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计，不得少于0.40mg。表2 3批样品含量测定结果

　　3 讨论

　　3.1 检测波长的确定 在选择检测波长时，笔者取样品在200～350nm波长范围内进行扫描，结果在276.5nm处有最大吸收，故选择276nm为检测波长。

　　3.2 流动相的选择 笔者比较了甲醇-水-磷酸(50:50:0.3)和甲醇-水-冰醋酸(50:50:1)等流动相，结果以甲醇-水-冰醋酸(45:55:1)分离效果最好。

　　采用HPLC法对制剂中的黄芩苷进行定量，结果准确，方便简便，重现性及回收率均理想，可以有效地控制产品的内在质量。

　　【参考文献】

　　[1] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典[M].2005年版，一部.北京：化学工业出版社，2005，1，370～371，405～406.