实验性可复性牙髓炎动物模型的建立

　　【摘要】 目的：探讨建立实验性可复性牙髓炎动物模型的具体实验方法。方法：选用20只雄性Wistar大鼠,每只鼠分别不喷水均匀磨除上颌第一磨牙牙釉质酸蚀牙本质,而正常组则不用处理。分别于术后0d(正常组)、1、3、5、7d处死动物,获取上颌骨及牙齿标本,经固定、脱钙后做5μm厚的连续切片,HE染色后光镜观察。结果：实验组牙髓组织发生典型的可复性炎症变化。结论：不喷水钻磨牙釉质酸蚀牙本质法诱导大鼠实验性可复性牙髓炎简便可行。

　　【关键词】 大鼠;可复性牙髓炎;动物模型

　　Determination of Schisandrin content of wild and cultivated Schisandra

　　BEI Lei,LIU Juan,WANG Li, SHEN Hongkuan,ZHAO Zhongli

　　(The College of Chemistry and Pharmacy of Jiamusi University, Jiamusi 154007,China;Jiamusi Municipal Laboratory for the Control of Drugs, Jiamusi 154007,China;. Harbin Municipal Fourth Hospital, Harbin 150000, China)

　　Abstract:Objective：To compare the component difference in wild and cultivated Schisandra Schisandrin in the Yichun region.Methods：High performance liquid chromatography was Used,with column Agilent C18 column(150mm×4.6mm,5μm) as filler,methanol-water(13:7) as mobile phase, 250nm as detection wavelength, 1mL/min as flow rate and room temperature as column temperature.Results：The Schisandra Schisandrin content of all areas of the Yichun region was greater than 0.4%.Conclusion：The method is simple, accurate and reproducible.

　　Key words:Schisandra chinensis(Turcz.); Schisandrin; high performance liquid chromatography; determination

　　牙髓炎根据其转归可分为可复性牙髓炎和不可复性牙髓炎。但其发生、发展及转归过程仍有许多核心问题迄今尚不清楚,因此建立合理的实验动物模型并在此基础上进行深入的研究是非常必要的。实验性牙髓炎动物模型的建立,是研究牙髓炎发病机制和有关治疗方法的基础。目前,国内外关于制备大鼠实验性牙髓炎模型的方法较多:如软龋置入法、内毒素脂多糖诱导法、高热刺激法、开髓开放法等[1～4]。但上诉方法建立的牙髓炎动物模型，多为不可复性牙髓炎，对于牙髓自身损伤修复机制的观察研究往往因为最后牙髓坏死而不够全面。如果能够建立实验性可复性牙髓炎动物模型，将更有利于牙髓损伤修复机制的研究。本文将采取简单的釉质磨除酸蚀法制备大鼠实验性可复性牙髓炎模型,在口腔内菌群的自然环境下观察牙髓的炎症变化过程,为实验性牙髓炎提供理想的动物模型。进行人类疾病发生机制或病理生理研究的动物模型必须尽可能模拟人类发病的过程,否则,所得的结果可能会与临床实际相差甚远，因此本实验采取机械性钻磨酸蚀法尽量模拟口腔内牙齿损伤及龋病发病机制建立动物实验性牙髓炎模型。

　　1 　材料与方法

　　1.1 实验动物及分组

　　Wistar大鼠，雄性，20只，体重200～280g，6月龄，口腔卫生良好,无龋齿及牙周病。均购自佳木斯大学医学院动物中心。根据不同的处死时间将20只大鼠随机分为5组，每组4只，即正常组，1d组，3d组， 5d组、7d组。

　　1.2 方法与步骤

　　大鼠称重后，以10%水合氯醛按3mL/kg腹部注射麻醉，将大鼠仰卧固定在实验台上，用备好的高速涡沦钻分别在大鼠左右上颌第一磨牙合面进行机械性不喷水钻磨，均匀磨除釉质厚度0.5mm,然后用酸蚀剂处理暴露的牙本质表面5min，正常组不做处理。各组鼠按规定时间分别于0d(正常组)、1d、3d、5d、7d脱颈处死，迅速截取左右上颌第Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ磨牙连同部分颌骨标本，立即将组织块放入10%甲醛溶液4℃固定48h，经甲酸盐酸(各20%)溶液脱钙10d后，流水冲洗24h，乙醇系列脱水，二甲苯置换，石蜡包埋。各标本作5μm厚的石蜡切片，进行HE染色染色后，光镜观察。

　　2 结果

　　2.1 正常组

　　正常鼠牙牙髓靠近牙本质内层可见排列紧密的成牙本质细胞,内侧有大量的牙髓细胞,细胞呈星形,胞浆突起互相连接,在牙髓间质内有血管 (图1)。

　　3 讨论

　　3.1 牙髓组织病理变化

　　本实验采用机械性钻磨牙釉质酸蚀牙本质法制备大鼠实验性可复性牙髓炎模型,观察大鼠牙髓组织病理变化,结果显示:1d、3d牙髓炎症反应逐渐加重,5d、7d牙髓炎症减轻修复性牙本质形成。此过程观察到了从牙髓初期炎症到牙髓炎症恢复的全过程,较好的显示了牙髓炎的发生、发展及牙髓防御、修复的过程。说明此方法可在短时间内形成可复性牙髓炎。

　　3.2 牙髓组织的修复特性

　　牙髓组织是一个微观的内分泌免疫网络。当牙髓受到刺激时，便会发生一系列的应激反应。牙髓损伤修复是一个多因素参与的复杂过程，涉及细胞学、分子学及信号转导等复杂机制。在牙髓损伤的早期，急性炎症反应和修复活动的启动是并存的，其结局也有两种可能:一种是炎症反应占优势，牙髓逐渐坏死或转为慢性炎症[5]。另一种是修复过程占优势，炎症消退，损伤区形成新的成牙本质细胞或成牙本质细胞样细胞，第三期牙本质形成，牙髓细胞恢复正常的生理功能。牙髓细胞的自愈和修复过程是一个连续的、相互作用的过程。它包括趋化、增殖、新血管生成、细胞外基质的重塑、细胞分化和导致修复性牙本质的形成。本实验各组HE染色结果，从最初的牙髓充血、水肿，成牙本质细胞空泡性变，至炎细胞浸润，最后的修复性牙本质形成，可直观地看到牙髓可逆性的损伤修复过程。

　　3.3 操作注意事项

　　本实验选择大鼠上颌磨牙做实验对象是考虑大鼠下颌磨牙较上颌小,另外大鼠固有口腔较小,下颌骨小且张口后缩,术区无法固定,不利于手术操作.将大鼠仰卧固定上颌,术野清晰,利于手术操作。由于大鼠牙冠厚度较薄约1mm左右,所以钻磨时要轻,深度不宜超过0.5mm,否则易出现穿髓,牙髓将会很快坏死,无法满足实验要求;同时要保持大鼠呼吸道通畅,防止大鼠窒息而死。

　　【参考文献】

　　[1]Cleaton-Jones P,Duggal M,Parak R,et al.Pulpitis induction in baboonprimary teeth using carious dentine or Streptococcusmutans[J].SADJ,2004,59(3):119122

　　[2]Warfvinge J,Dahlen G,Bergenholtz G.Dental pulp response to bacterial cell wall material[J].J Dent Res,1985,64(8):10461050

　　[3]Nelson JF,del Rio CE,Cornyn J.Reactions of rat odontogenic tissues toheat[J].Oral Surg Oral Med Oral Pathol,1990,70(6):773779

　　[4]Yamasaki M,Kumazawa M,Kohsaka T,et al.Pulpal and periapical tissue reactions after experimental pulpal exposure in rats[J].J Endod,1994,20(1):1317

　　[5]Magloire H，Joffre A，Bleieher F.An in vitro model of human dental pulp repair[J].J Dent Res，1996，75(12):19711978