宁夏回族人群CYP2C9基因多态性研究

　　【摘要】 目的 了解宁夏回族人群CYP2C9等位基因和基因型分布频率以及与其他不同民族之间的差异。方法 通过扩增引进限制性酶切位点(ACRS)和聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分析CYP2C9基因多态性，并与其他民族CYP2C9基因多态性分布进行比较。结果 宁夏回族人群中共检测到2种等位基因，CYP2C9*1、CYP2C9*3等位基因的频率分别为0.970、0.030，基因型CYP2C9*1*1、CYP2C9*1*3的频率分别为0.940、0.060。结论 宁夏回族人群CYP2C9*3等位基因频率与新疆维吾尔人群、欧美地区人群差异有统计学意义，与亚洲其他民族人群相比差异无统计学意义。

　　【关键词】 回族;CYP2C9;多态性;等位基因

　　The study on genetic polymorphism of CYP2C9 in Ningxia Hui

　　WANG Jian, et al.(Ningxia People's Hospital, Yinchuan 750021, China)

　　[Abstract] Objective To investigate the frequencies of the alleles and the genetypes of CYPC9 in Ningxia Hui and compared those in other ethnical groups. Methods The polymorphisms of CYPC9 gene was detected by ACRS and PCR-RFLP method, frequencies of the alleles and the genetypes were compared with those in other population. Results The frequencies of two alleles was found in Ningxia Hui(CYP2C9*1、CYP2C9*3)were respectively 0.970 and 0.030, The frequencies of CYP2C9*1*1 and CYP2C9*1*3 were respectively 0.940 and 0.060. Conclusion The distribution of polymorphism of CYP2C9 in Ningxia Hui is significantly different from that in Uygurs and Euro-American populations, but is similar to as found in Asian populations except for Uygurs populations.

　　[Key words] CYP2C9; Hui; Polymorphism; Allele

　　CYP 2C9在人肝脏微粒体中含量丰富，是参与药物代谢的主要P450酶。CYP 2C9基因报道的等位基因变异体已超过30种[1]，本研究主要通过扩增引进限制性酶切位点(ACRS)和聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术，分析CYP2C9*1、CYP2C9*3(A1075C)多态性，并结合国内外文献进行不同民族之间的差异比较，为宁夏地区回族人群个体化药物治疗提供理论依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 对象：收集2007年1-7月某伊斯兰阿语学校在宁夏自治区人民医院体检者200例为研究对象,男女各100例，年龄16-22岁，均为无血缘关系的回族个体，父母均为同一民族婚配，且祖居宁夏。抽取每位受试者静脉血3ml,采用北京赛百盛生物公司的硅胶膜基因组提取试剂盒提取基因组DNA，定量后稀释成100ng/μl, 储存于-20℃备用, 受试者了解试验过程并签署知情同意书。

　　1.2 PCR扩增及酶切：扩增CYP2C9*3位点上游引物[2]：5'-TGCACGAGGTCCAGAGGTAC-3';下游引物：5'-AAACATGGAGTTGCAGTGTAG-3';PCR反应参数：DNA模板2μl,上游引物1μl，下游引物1μl,DNA聚合酶0.25U，2*Reaction Mix 12.5μl(天根生化科技有限公司提供),补充超纯水至25μl，94℃预变性5min,94℃变性50s,60℃退火60s,72℃延伸1min，35个循环。最后72℃再延伸5min，取PCR产物6μl，用1.5%琼脂糖凝胶进行电泳分析，取成功扩增出目的片段的PCR产物5μl，加入KpnⅠ5U于37℃酶切过夜。酶切产物用4.0%琼脂糖凝胶电泳确定CYP2C9基因型。

　　1.3 统计学方法：基因计数法计算CYP2C9基因型和等位基因频率，经Hardy-Weinberg遗传平衡定律检验[3]。各组之间的基因型和等位基因频率的比较采用SAS统计软件进行χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 CYP2C9位点基因型检测结果：PCR扩增产物为131bp(CYP2C9*3),酶切后，CYP2C9*1*1表现为131bp 1条带、CYP2C9*1*3表现为131bp、110bp、21bp 3条带(图1，目录后)。200例体检者中检测到2种等位基因：CYP2C9*1*1、CYP2C9*1*3基因型频率分别为0.94、0.06，未检测到CYP2C9*3*3基因型，见表1。经χ2检验，受试样本CYP2C9基因型及等位基因频率分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律，具有群体代表性。

　　2.2 不同国家或地区人群CYP2C9基因多态性分布比较：宁夏回族人群CYP2C9基因多态性与不同国家或地区人群分布[4-5]比较见表1。表1 CYP2C9等位基因频率与不同人群比较

　　3 讨论

　　体内外实验均证明CYP2C9*3位点突变体活性下降[6]，本研究利用突变型等位基因CYP2C9*3多态位点中的C连同上游引物中的错配碱基G产生一个KpnⅠ酶切位点，这样，突变基因型的PCR产物能被KpnⅠ酶切，而野生型不能被酶切。结果显示，CYP2C9*1、CYP2C9*3等位基因的频率分别为0.97、0.03，基因型CYP2C9*1*1、CYP2C9*1*3、CYP2C9*3*3的频率分别为0.940、0.060、0。CYP2C9*3等位基因频率显著性低于新疆维吾尔族(0.170)、意大利(0.091)、土耳其(0.100)、匈牙利人群(0.094)，与北京汉族(0.040)、马来西亚(0.033)、越南(0.022)相近，而高于韩国(0.010)、日本(0.010)。由表1可见，亚洲大部分地区与欧美人群CYP2C9*3基因多态性分布差异有统计学意义。

　　在弱代谢者中尤其是CYP2C9*3*3个体可能会因为代谢缓慢而产生严重的毒副作用[7]。研究人群中药物代谢酶基因多态性及其与药物效应间的相关性，将有助于临床医师根据患者的基因型选择合理药物和最佳剂量，尽可能地减少和避免不良反应的发生，以达到个体化治疗。

　　【参考文献】

　　[1] Magnus IS,Ann KD,Daniel WN,et al.CYP2C9 allele nomenclature[EB/OL]. http://www.imm.ki.se/CYPalleles/cyp2c9.htm.2009,08:31.

　　[2] Yasar U,Eliasssn E,Dahl ML,et al.Validation of Methods for CYP2C9 Genotyping:Frequencies of Mutant Alleles in a Swedish Population[J]. Biochem Biophys Res Communicat，1999,254(3):628-631.

　　[3] 陈大方，陈常中.医学科研数据的处理与分析方法[M].北京：北京大学医学出版社，2006：153.

　　[4] Xie HG,Prasad HC,Kim RB,et al. CYP2C9 allelic variants ethnic distribution and functional significance[J].Adv Drug Deliv Rev,2002,54(10):1257-1266.

　　[5] Yang JQ,Morin S,Verstuyft C,et al.Frequency of cytochrome P4502C9 allelic variants in the Chinese and French populations[J].Fundam Clin Pharmacol，2003,17:373-376.

　　[6] Takanashi K, Tainaka H, Kobaysshi K, et al.CYP2C9Ile359 and Leu359 vaiants: enzyme kinetics study with seven substrates[J].Pharmacogenet,2000,10:95-104.

　　[7] 周君霞,沈行良.细胞色素P4502C9基因多态性影响药物代谢动力学的研究[J].临床荟萃,2008，23(12):908-910