Lugol’S液食管染色联合MUC2检测对Barrett食管的诊断价值

　　【摘要】 目的 使用Lugol’s液进行食管染色联合黏蛋白2(MUC2)检测对Barrett食管(BE)的诊断价值。方法 对胃镜下初步诊断为BE食管的患者，分为A、B两组， A组为实验组24例，行2%Lugol’s液10-20ml食管染色，1-min3食管黏膜迅速染色，在食管不着色区取活检(靶向活检)2-4块送HE染色病理检查，同时行免疫组化检测MUC2表达情况;B组为对照组20例，在紧靠齿状线下方、齿状线舌形突出、齿状线上岛形橘红色黏膜处取活检2-4块，送HE染色病理检查。结果 A组HE染色病理诊断为BE21例，7例为肠化型，HE染色病理诊断的BE中有13例MUC2阳性表达;B组HE染色病理确诊为BE12例，其中3例为肠化型BE;两组BE检出率比较，差异有统计学意义(χ2=4.4，P<0.05);两组肠化型BE检出率亦有统计学意义(χ2=7.232，P=0.007<0.05)。结论 Lugol’s液食管染色进行靶向活检可以提高BE的诊断率，MUC2检测显著提高了肠化型BE的诊断率。

　　【关键词】 Lugol’s液;黏蛋白2;Barrett食管;靶向活检

　　The study of the expression of MUC2 combined Lugol's solution staining Barrett's esophagus in the patients with Barrett's esophagus

　　YANG Xiao-rong, YANG Li, ZHANG Fei-xiong.(The Affiliated Hospital of Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, China)

　　[Abstract] Objective To study the expression of MUC2 combined Lugol's solution staining in the patients with Barrett's esophagus. Methods All the 44 Barrett's esophagus were diagnosed by the endoscopy. They were randomized into two groups: group A (experiment group), 24 cases stained with 10～20ml Lugol's solution first. After 1～3min, 2～4 Biopsies were taken from unstained areas. Group B (control group), 20 cases, 2～4 biopsies were taken from orange areas of esophagus. The expression of the MUC2 were detected by immunohistochemistry in the group A. Results 21 cases in the A group were confirmed Barrett's esophagus by pathologist, And 7 cases were found the intestinal metaplasis in the Barrett's esophagus. And the MUC2 were positive in 13 cases. 12 cases in the group B were confirmed Barrett's esophagus by pathologist, and 3 cases were found the intestinal metaplasis in the Barrett's esophagus. The detective rate of Barrett's esophagus was significant difference between group A and group B (χ2=4.4, P=0.0362). And the detection of the intestinal metaplasia was also significant difference Between group A and group B (χ2=7.232, P=0.007).Conclusion The Lugol's solution staining could increase the diagnostic rate of Barrett's esophagus, and combination of detecting the expression of MUC2 can increase the diagnostic rate of the intestinal metaplasia.

　　[Key words] Lugol's solution; MUC2; Barrett's esophagus; Target; Biopsy

　　Barrett食管(BE)是反流性食管炎的并发症之一，肠化型BE是食管腺癌的癌前病变[1]，其诊断主要是普通内镜检查和食管黏膜活检。目前BE的诊断率和估计的发病率差异较大，常规HE染色肠化型BE的检出率低，缺乏肠化型BE的客观诊断指标。Lugol’s液食管染色是色素内镜技术中最常用的食管染色的方法，单纯Lugol’s液食管染色提高了BE的诊断率，但未提高肠化型BE的诊断率。黏蛋白2(MUC2)在BE肠化生中由杯状细胞产生，与人类正常结肠上皮相似，MUC2的表达是BE肠化的特异性标志[2]。因此，研究Lugol’s液食管染色联合检测MUC2对BE的诊断价值有重要的临床意义。

　　1 资料和方法

　　1.1 一般资料：选取我院胃镜室2008年4月-2008年10月普通内镜下诊断为BE的患者44例，男28例，女16例，男女比例为1.8∶1，年龄33-82岁，平均55.8岁。有烧心感29例(65.9%)，反酸24例(54.5%)，胸骨后疼痛感8例(18.2%)，其余7例(15.9%)表现为不同程度的腹胀及上腹部不适感。内镜下BE诊断标准为2006年10月三亚《中国胃食管反流病共识意见》[2]。检查前确认患者无碘过敏史、甲状腺机能亢进疾病史，向患者交代Lugol’s液食管染色能清晰显示食管黏膜病变的优点，以及可能出现碘过敏、胸痛、烧心等不良反应，患者均自愿接受。44例病人根据就诊号分为两组，A组为实验组24例，男15例，女9例，平均年龄57.5岁，行Lugol’s液食管黏膜染色，在食管黏膜不染色区和淡染色区取活检组织2-4块; B组为对照组20例，男13例，女7例，平均年龄55.0 ，在胃-食管连接部以上、齿状线以下食管橘红色黏膜处和(或)齿状线上舌状、岛屿状橘红色黏膜处取活检组织2-4块 。两组标本经10%福尔马林固定，石蜡包埋备用。

　　1.2 试剂：2% Lugol’s液(本院制剂中心配制)，鼠抗人黏蛋白2单克隆抗体(1∶50，北京中杉金桥生物技术有限公司)，SP-0023免疫组化染色试剂盒(北京博奥森生物技术有限公司)。

　　1.3 方法

　　1.3.1 染色方法：A组病人在胃镜初步诊断为BE后，将胃镜退至食管，用50-100ml蒸馏水反复冲洗食管黏膜并吸干净，然后将自制喷洒管经胃镜活检空插至贲门口，自下而上喷洒2% Lugol’s液10-20ml，使之均匀涂布于全食管黏膜，1-3min以后观察食管黏膜着色情况(图1、2，封二)。在不染色区和淡染色区取活检组织2-4块，即靶向活检，之后胃镜插至胃内黏液湖，尽可能吸净胃内黏液和Lugol’s液。

　　1.3.2 检测方法：采用石蜡标本集中连续切片，片厚4μm，免疫组化染色方法采用三步法，以已知MUC2表达阳性的结肠癌组织为阳性对照(图3，封二)，以PBS液分别代替一抗、二抗作阴性对照(图4，封二)。

　　1.3.3 免疫组化染色判断标准：MUC2主要表达在细胞质，呈棕黄色颗粒者为阳性，超过10%的细胞阳性表达记为阳性。

　　1.3.4 肠化型BE诊断条件：常规HE染色镜下见杯状细胞或MUC2表达阳性即诊断为肠化型BE。

　　1.4 统计学方法：应用SPSS11.5统计软件进行统计学分析，检出率以%表示，采用行×列表资料的χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 两组病人普通内镜下形态分类情况：见表1。表1 两组内镜下BE形态分型情况[n(%)]

　　2.2 两组病人常规HE染色病理检查：B组病理诊断BE 12例，RE 3例，其余5例提示鳞状上皮增生(表2)。表2 两组常规HE染色检出的比较[n(%)]注：肠化型BE检出率两组比较，χ2=0.12，P>0.05

　　2.3 A组病人食管活检组织蜡块行免疫组化染色：见图5、6(封二)。HE染色病理检查诊断的7例肠化型BE均见MUC2阳性表达，3例胃底型BE和3例贲门型BE亦见MUC2阳性表达，MUC2阳性表达率为54.2%，A组合计诊断肠化型BE病人13例。两组肠化型BE诊断情况，A组13例(54.2%)，B组3例(15.0%);两组肠化型BE诊断率比较，差异有统计学意义(χ2=7.232，P<0.05)。

　　3 讨论

　　Barrett食管是由英国心胸外科医生Norman Barret于1950年首先报道提出，并以他自己的名字命名。我国专家于2006年8月在海南三亚召开的全国胃食管反流病学术研讨会[1]，将Barrett食管定义为食管远端的鳞状上皮被柱状上皮所代替的一种病理现象，可伴有肠化生或无肠化生，肠化型BE食管腺癌癌前病变。Cossentino等[3]研究证实，BE患者患食管腺癌的危险性是正常人的30-60倍。Caneron等[4]发现食管腺癌中BE的发生率为100%，食管-胃结合部腺癌中BE的发生率为42%。食管末端的腺癌几乎均起源于BE，而40%的贲门癌与BE有关[5-6]。

　　BE为世界性疾病，近年来BE发病率呈上升趋势，Conio认为诊断率与估计的发病率差异较大[7]。目前诊断BE的重要且可靠的方法是内镜结合组织病理检查[2]。金标准仍然是组织病理检查[8]，但存在许多问题：①普通内镜加组织病理检查，BE诊断率低于估计的发病率;②常规HE染色病理组织检查，肠化型BE的检出率低;③常规四象限取材法，存在耗时、取材多、并发出血穿孔的风险;④病理医生主观判断的差异，难以准确识别不典型杯状细胞，缺乏客观的判断指标;⑤内镜医生与病理医生脱节，病理医生只注重柱状上皮而忽视取材部位;⑥内镜下取材的盲目性。

　　MUC2是MUC2基因编码的一种分泌型黏蛋白，主要在十二指肠和结肠的杯状细胞核周及核上表达，在人体小肠、大肠组织中表达占优势。MUC2表达是正常杯状细胞所特有的，在正常食管黏膜无MUC2的表达，在BE肠化生中由杯状细胞产生MUC2，这与人类正常结肠上皮相似。杯状细胞MUC2高强度表达是肠化生的特异性标志和主要特征之一[9]，免疫组化检测MUC2可作为BE肠化的指标之一[1]。赵晶京[10]对黏蛋白的研究发现，在BE肠化上皮中见MUC2强阳性表达，阳性表达主要位于杯状细胞胞浆中;MUC2在BE肠化生中由杯状细胞产生，检测MUC2的表达，有助于特殊肠上皮化生的早期识别。

　　鉴于目前常规内镜BE检出率与估计发病率差异大，肠化型BE是食管腺癌癌前病变，常规HE染色肠化型BE检出率低，很少应用标志物作为BE诊断的客观诊断标志物。本研究中使用Lugol’s液进行食管黏膜染色指导靶向活检，两组活检组织行常规HE染色病理检查，A组诊断BE病人21例，B组诊断BE病人12例，两组BE检出结果差异有统计学意义。说明A组单纯Lugol’s液食管染色组明显提高了BE检出率。其中A组常规HE染色7例诊断肠化型BE，B组常规HE染色3例诊断为肠化型BE，两组常规HE染色病理检查肠化型BE的检出率比较差异无统计学意义，说明单纯Lugol’s液食管染色行活检未能提高肠化型BE的检出率。本研究把MUC2作为肠化型BE诊断指标之一，应用免疫组化对A组病例食管黏膜活检组织进行MUC2表达检测，结果却显示7例肠化型BE全部表达MUC2，3例胃底型BE和3例贲门型BE也有MUC2表达，而普通病理未诊断的BE的食管组织均未见MUC2表达;MUC2的阳性表达率为54.2%，即为肠化型BE的检出率为54.2%，明显高于常规HE染色肠化型BE的检出率(15%)，说明Lugol’s液食管染色进行靶向活检联合MUC2免疫组化检测能够显著提高了肠化型BE的诊断率。天津医科大学总医院消化科李姝等人[12]研究显示，正常食管黏膜上皮和反流性食管炎黏膜均未见MUC2表达，BE病人中MUC2阳性表达率为64.1%。在本研究中，A组MUC2的阳性表达率为54.2%，低于李姝等人的研究结果，原因可能与本研究样本量小有关。本研究在常规HE染色病理检查未诊断肠化型BE的6例BE病例中，应用免疫组化都检测到MUC2的表达，其原因认为常规HE染色病理检查存在以下不足：①肠化早期杯状细胞有时并不明显突出，HE染色不能发现;②仅有纹状缘的肠化上皮常常很难与胃柱状上皮鉴别;③活检标本少，常常挤压变形，杯状细胞识别困难。因此，拟诊BE的患者常规应用免疫组化检测MUC2的表达，可以提高肠化BE的检出率。

　　综上所述，为提高对BE尤其是肠化型BE的检出率，对普通内镜诊断为BE的患者常规行Lugol’s液食管黏膜染色后取活检，并行免疫组化检测MUC2，能显著提高BE及肠化BE的诊断率。对该部分病人进行密切随访，定期复查胃镜，能够及时检出食管早期病变，对发现有重度不典型增生和早期癌的病人进行积极的处理，如行内镜下黏膜切除术(ESD)治疗，对降低食管腺癌的发病率和死亡率有重要的临床意义。

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