双丹膏中丹参质量控制方法的研究
摘要 目的：建立双丹膏中丹酚酸B质量控制方法，确保药品的质量。方法：用HPLC法测定制剂中丹酚酸B的含量。Kromasil TM C18 (4.6mm×250mm,5μm)柱；甲醇-乙腈-0.25%磷酸（30：10：60）为流动相；检测波长286nm。结果：丹酚酸B在0.1742～2.4393μg 范围内，进样量与色谱峰面积之间呈良好线性关系（r=0.9999）。平均加样回收率为99.56% ；RSD为1.59% （n=6）。结论：本法准度高，重复性好，稳定可靠，可作为双丹膏质量控制的方法。
关键词 高效液相色谱法；双丹膏； 丹酚酸B
双丹膏收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十四册，由丹参和牡丹皮2味药组成，具有养心活血,化瘀止痛之功效。现行标准（WS3-B-2669-97）中仅有常规检查项,不能有效控制产品的质量。本文建立HPLC测定丹酚酸B含量的方法,进行方法学考察，结果满意。
1仪器与试药 Aglient1200SLseries高速液相色谱仪,G1314CWD紫外检测器、柱温箱。乙腈(色谱纯);甲醇(色谱纯);磷酸(色谱纯);超纯水.丹酚酸B对照品(批号:111562-200302)， 中国药品生物制品检定所。双丹膏（批号：080429、080510、080812，山东方健制药有限公司。）
2方法与结果 2.1色谱条件:Kromasil TM C18柱(250mm×4.6mm,5
μm)；甲醇-乙腈-0.25%磷酸（30：10：60）为流动相；检测波长286nm。柱温30℃，理论板数按丹酚酸B计算不低于 3000。2.2 线性关系考察 称丹酚酸B 10.89mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释到刻度，摇匀。 分别进样1、2、4、6、8、10、12、14μl进行测定。以进样量Ｘ(μg）为横坐标，峰面积Y为纵坐标，进行线性回归，回归方程为：Y=-1.5428+1276.204X ，r=0.999987。结果表明丹酚酸B 在0.1742～2.4393μg 范围内呈良好线性关系。
2.3 干扰试验 按样品处方比例制备不含丹参药材的阴性对照溶液。取阴性对照溶液和样品溶液各10μl、对照品溶液10μl，按上述色谱条件进行测，结果阴性样品对样品测定无干扰。
2.4 精密度试验 取对照品溶液（0.17424 mg·ml-1）10μl，连续进样6次，丹酚酸B平均峰面积为673.191，RSD分别为0.14% 。
2.5 重复性试验 取同一批号样品（080429）5份，按2.6项下方法进行测定， 重复性良好。
2.6 样品测定 取本品约2.0g，精密称定，置50ml量瓶中，精密加水约40ml，密塞，超声10分钟，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。按上述色谱条进行测定，结果3批样品含量（mg·g-1）分别为0.986，1.10，1.05。
2.7加样回收试验 精密称取已知含量的同一批样品(080429)约1.0g，共6份，分别置50ml容量瓶中，精密吸取丹酚酸B对照品溶液（0.2264mg·ml-1）6份，每份5ml，置上述容量瓶中。按样品含量测定方法测定，计算回收率。结果见表4
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表4 加样回收试验测定结果（n=6）
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编号
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样品含量(mg)
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对照品加入量(mg)
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测得量
（mg）
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回收率
（%）
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平均回收率
（%）
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RSD
(%)
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1
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1.146
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1.132
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2.271
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99.38
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2
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0.990
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1.132
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2.123
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100.09
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3
|
1.070
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1.132
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2.207
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100.44
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99.56
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1.59
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4
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1.141
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1.132
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2.271
|
99.82
|
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5
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1.184
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1.132
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2.277
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96.55
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6
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1.120
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1.132
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2.264
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101.06
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2.8 稳定性试验 在不同时间，对同一供试品溶液进行测定，每隔1h测定一次，共测定6次， 峰面积相对标准偏差RSD为1.7% 。供试品溶液在6h内稳定。
3讨论 3.1提取条件的选择 考察了70%乙醇、乙醇、70％甲醇、甲醇和水5种溶剂分别在超声和热回流2种提取方式下丹酚酸B的提出率，结果显示用水作为溶媒,超声提取 10分钟能将丹酚酸B提取完全。
3.2色谱分离条件选择 分别选用sunFireTM C18(150 mm×4.6 mm,5μm)；Agilent TC-
C18 (250mm×4.6mm，5μm)和Kromasil TM C18 (250mm×4.6mm，5μm)进行样品色谱分析，结果后两种色谱柱分离效果较好。故选用Kromasil TM C18 (250mm×4.6mm，5μm)色谱柱。参考文献：[1]卫生部药品标准中药成方制剂第十四册[S].1991.188
[2] 李正国，郭凡岭，张爱芹 RP- HPLC测定双丹颗粒中丹参素和原儿茶醛含量.药物分析杂志，2004，24 （5）：558.
[3] 王凤美，李磊，柳先平，等.丹参药材中丹酚酸B的提取及其HPLC测定.现代中药研究与实践，2004，18（S1）：62.