作者：何晓燕    作者单位：浙江衢化医院 病理科，浙江 衢州 324004)
　　【摘要】  目的 探讨CD44v6和PTEN蛋白在胆囊癌中的表达以及与临床病理的关系。方法 采用免疫组化检测43例原发性胆囊癌、20例慢性胆囊炎组织中CD44v6和PTEN蛋白的表达情况。结果 43例胆囊癌组织中CD44v6和PTEN蛋白阳性表达率分别为67.4%和34.9%。胆囊癌组织中CD44v6表达阳性率显著高于慢性胆囊炎对照组(χ2=21.34，P<0.01)，而PTEN表达阳性率显著低于慢性胆囊炎对照组(χ2=23.44，P<0.01)。CD44v6高表达和PTEN蛋白低表达与胆囊癌的分化程度、病理分期及淋巴结有无转移存在相关性。胆囊癌组织中CD44v6与PTEN表达呈负相关(χ2=4.22，P<0.05)。结论 在胆囊癌组织中CD44v6的高表达与PTEN的低表达与胆囊癌的发生、发展、浸润转移密切相关，CD44v6和PTEN蛋白表达可作为评价胆囊癌生物学行为的参考指标之一。

　　【关键词】  CD44v6蛋白;PTEN蛋白;胆囊肿瘤;免疫组织化学

　　Expression of CD44v6 and PTEN in gallbladder cancer and its relation to clinicopathologyHE Xiaoyan. Department of Pathology， Zhejiang Quhua Hospital， Quzhou 324004　Abstract Objective To explore the expression of CD44v6 and PTEN and the relationship with the clinic pathologic significances in gallbladder cancer. Methods Expression of CD44v6 and PTEN protein in 43 cases of primary gallbladder cancer， 20 cases of chronic cholecystitis were detected with immunohistochemical staining. Results In chronic cholecystitis， the positive expression rate of CD44v6 and PTEN was 67.4% and 34.9%. In gallbladder cancer， the positive expression rate of CD44v6 was significantly higher than that in chronic cholecystitis， and the positive expression rate of PTEN protein was significantly lower than that in chronic cholecystitis. High?expression of CD44v6 and low?expression of PTEN were closely related with differentiation， pathological stage and lymph node metastases of gallbladder cancer. Conclusion In gallbladder cancer， high?expression of CD44v6 and low?expression of PTEN are closely related with genesis， development， and infiltration of cancer. Expression of CD44v6 and PTEN protein can be used for the evaluation of the biological behavior and prognostic indicators of gallbladder cancer.

　　Key words CD44v6 protein; PTEN protein; gallbladder neoplasms; immunohistochemistry

　　原发性胆囊癌(primary gallbladder carcinoma，PGC)是胆道系统最常见的恶性肿瘤，其恶性程度高，易发生淋巴结转移，预后差，而早期无特定的临床症状和体征，诊断非常困难，严重危害着人类的身体健康。众多研究表明，胆囊癌的发生发展、侵袭转移是多个基因共同作用的结果。本研究应用免疫组织化学方法检测43例胆囊癌组织中CD44v6和PTEN的表达情况，旨在探讨CD44v6和PTEN蛋白表达与胆囊癌的发生发展、组织类型、病理分级及转移状况的关系，以及两种基因蛋白表达之间的关系。

　　1 资料和方法

　　1.1 一般资料 收集本院1998年1月至2007年12月间资料完整的43例经手术切除的原发性胆囊癌组织标本，其中男16例，女27例，年龄37～79岁，平均58.7岁。病理学分级高分化腺癌14例，中分化腺癌13例，低分化腺癌l6例。胆囊癌标本按Nevin分期，I～Ⅲ期14例，Ⅳ～V期29例。无转移14例，有淋巴结或远处转移29例。同时选取20例慢性胆囊炎标本作为对照组。

　　1.2 免疫组化染色

　　1.2.1 试剂：CD44v6(产品编号ZM?0052)为鼠抗人单克隆抗体，PTEN(产品编号ZM?0221)为鼠抗人单克隆抗体，Supervision检测试剂盒和DAB显色试剂盒均购自北京中杉生物技术有限公司。

　　1.2.2 方法：组织经10%的中性福尔马林固定，石蜡包埋，切片厚3~4 ?滋m，免疫组化采用 Supervision法。按照说明逐项操作。

　　1.3 免疫组化结果判断 CD44v6和PTEN阳性产物呈棕黄色或棕褐色，分别定位于细胞膜和细胞核。依据染色程度及阳性细胞数来计算评分。①染色强度：0分为阴性，1分为弱阳性，2分为阳性，3分为强阳性。②阳性细胞数：无阳性细胞为0分，阳性细胞数1%～25%为1分，阳性细胞数26%～50%为2分，阳性细胞数超过50%为3分;两者之和为3～6分者评为免疫组织化学染色阳性。

　　1.4 统计学方法 采用SPSS14.0分析软件进行统计学处理。以χ2检验分析各样本的差异，以P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 CD44v6和PTEN蛋白在胆囊良恶性病变组织中的表达 CD44v6在胆囊癌组织中的阳性表达率显著高于慢性胆囊炎(χ2=21.34，P<0.01);PTEN蛋白在胆囊癌组织中的阳性表达率显著低于慢性胆囊炎(χ2=23.44，P<0.01)，见表1。

　　2.2 CD44v6和PTEN蛋白表达与胆囊癌病理分级和Nevin分期的关系 本组资料显示，CD44v6和PTEN蛋白在不同分化程度的胆囊癌之间、不同Nevin分期的胆囊癌之间差异有统计学意义， CD44v6高表达和PTEN低表达与胆囊癌的分化程度及Nevin分期密切相关，见表2。

　　2.3 CD44v6与PTEN蛋白表达之间的关系 在CD44v6阳性表达的29例胆囊癌中，PTEN阳性表达为2例(6.9%)，在CD44v6阴性表达的14例胆囊癌中，PTEN阳性表达者13例(92.9%)。胆囊癌中CD44v6与PTEN蛋白表达呈负相关(χ2=4.22，P<0.05)。

　　3 讨论

　　恶性肿瘤的发生发展是一种复杂的多阶段过程，与多个基因和多种分子水平变化密切相关。细胞?细胞或细胞?细胞外基质之间粘附特性的异常表达是恶性肿瘤细胞最基本的生物学特征之一。CD44分子主要参与细胞与细胞、细胞与基质之间的特异性粘连过程，是粘附分子家族的重要成员，是细胞表面的一种跨膜糖蛋白。人类CD44基因定位于11号染色体短臂上，主要有标准型CD44S和变异型CD44V两类。CD44V通过V区外显子选择剪接产生多种不同的变异体，主要出现在机体的病理过程、特别是肿瘤的发生发展过程中[1]。CD44v6是一种最早发现的CD44粘附分子，是CD44的一种拼接变异体，其表达可改变肿瘤细胞表面粘附分子的构成和功能，在肿瘤细胞侵袭和转移过程中起促进作用[2]。近年来较多研究报道，CD44v6表达与许多恶性肿瘤如乳腺癌、肾癌、肺癌、胃癌、肠癌等的发生发展、侵袭和转移密切相关[3-7]。本研究结果显示，CD44v6在胆囊良性病变和恶性肿瘤中表达差异有统计学意义，在原发性胆囊癌中的阳性表达率(67.4%)明显高于慢性胆囊炎(P<0.01)。这说明CD44v6与原发性胆囊癌的发生发展密切相关。CD44v6在低分化胆囊癌组的阳性表达率明显高于高中分化胆囊癌组(P<0.05);在Nevin Ⅳ～V期的胆囊癌患者阳性表达率明显高于Nevin Ⅰ～Ⅲ期的患者(P<0.05)。胆囊癌中CD44v6的表达随着癌细胞分化程度的减低及淋巴结远处转移，其阳性表达率亦随着明显提高。这证实CD44v6阳性率高者侵袭能力强，易发生转移;说明CD44v6不但与原发性胆囊癌的发生发展密切相关，而且在其临床进展和侵袭转移过程中起着重要的作用。

　　PTEN是1997年发现的第一个编码具双重特异性磷酸活性(DSP)产物的抑癌基因，定位于人类染色体10q23.3，具有9个外显子和8个内含子，编码一个由403个氨基酸组成的蛋白质。PTEN基因所编码的蛋白的主要功能就是参与细胞增殖和凋亡中所发生的去磷酸化作用，而去磷酸化作用对细胞增殖具有负调节效应，其突变或缺失在调节细胞的增殖和死亡、细胞的转移等方面起到重要作用，与人类恶性肿瘤的发生和发展密切相关[8-10]。本研究结果显示，PTEN在胆囊良性病变和恶性肿瘤中表达差异有统计学意义，在原发性胆囊癌中的阳性表达率(34.9%)明显低于慢性胆囊炎(P<0.01)。这提示，PTEN蛋白失活在胆囊癌的发生发展中起重要作用。PTEN在低分化胆囊癌组的阳性表达率明显低于高中分化胆囊癌组(P<0.01);PTEN在Nevin Ⅳ～V期的胆囊癌患者阳性表达率明显低于Nevin Ⅰ～Ⅲ期的患者(P<0.01)。PTEN蛋白表达与肿瘤组织分化程度及Nevin分期明显相关，且PTEN在高中分化胆囊癌和Nevin Ⅰ～Ⅲ期中呈高水平表达，提示PTEN的这种表达状况可能有一定的临床病理意义，对判断胆囊癌的分化程度和转移起重要作用。

　　CD44v6的表达增高及PTEN的表达缺失与胆囊癌的发生发展密切相关，并在胆囊癌的细胞分化和转移过程中起重要的作用。本研究发现，在胆囊癌组织中CD44v6的表达与PTEN的表达之间呈负相关。这表明，CD44v6高表达和PTEN低表达在胆囊癌的发生发展和转移过程中可能起到协同作用。检测两者基因的表达可作为评估胆囊癌生物学行为的参考指标。

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