【关键词】物质,优化,研究,营养,生长,紫平,菌丝,野生,
作者于2005年7月,在山东省农业科学院植物保护研究所温室内枸树下采集到一株旺盛生长的野生紫色平菇状真菌子实体。采集地环境空气温度28℃左右,当天平均气温27℃,昼夜温差为9℃,可见其适合在高温环境中生长。目前,国内尚未有类似特性食用菌品种报道。经初步鉴定,该菌属真菌门、担子菌纲、伞菌目、侧耳科、侧耳属平菇(Pleurotus ostreatus),暂定名为紫平[1]。菌丝分离培养成功后,经活体(鸡)长期饲喂试验,确定该菌无毒可食。该菌株的发现对于丰富食用菌品种资源,弥补高温季节食用菌品种稀少,提供新的育种材料,具有重要意义。为了驯化栽培该菌株,本试验对其菌丝生长所需要的营养物质进行了优化研究。
1 材料与方法
1.1 供试菌株
野生紫平,本所采集、分离、培养、保存菌株。
1.2 供试基础培养基
1.2.1 萨市(Sabouraud’s)培养基 蛋白胨10 g,琼脂20 g,麦芽糖40 g,复合维生素B 1片(含维生素B1 3 mg,维生素B2 1.5 mg,维生素B6 0.2 mg,烟酰胺10 mg,右旋泛酸钙1 mg),加水至1 000 ml,1.3×105 Pa灭菌40 min。
1.2.2 复合培养基 葡萄糖20 g,蛋白胨3 g,磷酸二氢钾2 g,琼脂粉20 g,加水至1 000 ml,1.3×105 Pa灭菌40 min。
1.3 试验方法
1.3.1 接种 从试管斜面菌落边缘挑取紫平菌丝,接种到PDA培养基平板上,25℃恒温培养,长满平板后,用打孔器在菌落边缘,打成直径5 mm的菌块,接种到供试培养基上进行试验。
1.3.2 营养物质对菌丝生长的影响试验
①碳源:分别用含有相同含碳量的葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、淀粉代替1.2.1萨市基础培养基中的麦芽糖,对紫平菌丝进行培养、观察。
②氮源:分别用相同含氮量的硫酸铵、尿素、酵母浸粉和硝酸钾代替1.2.2培养基中的蛋白胨,在相同培养条件下,对紫平菌丝进行培养、观察。
③碳氮比:在1.2.2基础培养基中,以1 000 ml培养基中葡萄糖与蛋白胨(蛋白胨含碳量对试验处理碳氮比的影响忽略不计)的总质量23 g不变,添加不同量的葡萄糖与蛋白胨,使培养基的碳氮比分别为10∶1、15∶1、20∶1、25∶1、30∶1,接种后在相同培养条件下,观察对比不同碳氮比对紫平菌丝生长的影响。
④复合维生素B:在1.2.2的培养基中,使用复合维生素B的添加量分别为0、5、10、15、20 mg,在相同培养条件下,对紫平菌丝进行培养、观察。
⑤硫酸镁:在1.2.2的培养基中,分别加入0、1.5、3.0、4.5、6.0 g的硫酸镁,在相同培养条件下,对紫平菌丝进行培养、观察。
⑥根据试验结果进行数据分析,得出最佳配方,其中碳源和氮源的数据应该满足以下要求:
a.碳源和氮源的总质量与食用菌常用培养基1.2.2相同,为23 g;
b.碳氮比为1.3.2中得出的结论,用C代替。
设碳源为X,含碳量为A;氮源为Y,含氮量为B,联立方程如下:
X+Y=23,AX/BY=C
1.3.3 菌丝长速及生长势观察 各处理平板培养5 d,分别用十字交叉法测量菌落直径,计算菌丝日均生长速率,同时观察记录菌丝生长势,主要依据为菌丝粗细、浓密程度、菌落完整性等。
2 结果与分析
2.1 碳源
由表1可以看出,紫平菌丝在6种碳源中都能生长,菌落完整,但长势不同。在碳源为麦芽糖的培养基上长势最好、生长速度最快,与其它处理之间差异极显著;在碳源为蔗糖和淀粉的培养基上菌丝长势较好,二者长速差异不显著;碳源为葡萄糖和果糖的培养基上长势较差,二者差异不显著。可见,紫平菌丝适宜的碳源是麦芽糖,其次为淀粉和蔗糖。
2.2 氮源
由表2可以看出,紫平菌丝在5种氮源中均能生长,菌落完整,但长势不同。在氮源为蛋白胨的培养基中长势最好、生长速度最快,与其它处理比较,差异极显著;其次为酵母浸粉培养基;氮源为硫酸铵和硝酸钾的培养基中菌丝长势较差,氮源为尿素的培养基中菌丝长势最差。可见,紫平菌丝适宜的氮源是蛋白胨,其次是酵母浸粉,其它氮源则不适合紫平菌丝生长。
2.3 碳氮比
由表3可以看出,菌丝在不同碳氮比的培养基中都能生长,保持了完整的菌落形态,但是长势不同。碳氮比为25∶1时长势最好,生长速度最快,与其它处理相比,差异极显著,碳氮比为10∶1、15∶1、20∶1、30∶1时菌丝长势较差,它们之间差异不显著。可见,紫平菌丝适宜的碳氮比是25∶1,与一般栽培平菇的经验碳氮比要求相似。
2.4 复合维生素B
复合维生素B是食用菌母种培养基中需要添加的重要成分,其添加量对不同的食用菌种类生长差异很大。由表4可以看出,菌丝在不同含量复合维生素B的培养基中都能生长,保持了完整的菌落形态,但是长势不同。复合维生素B 为15 mg和10 mg时菌丝长势最好、生长速度最快,与其它处理相比,差异显著;5 mg和20 mg时长势较好于对照,但与对照差异不显著。可见,紫平菌丝适宜的复合维生素B浓度为10～15 mg/L。
2.5 硫酸镁
由表5可以看出,菌丝在含有不同浓度硫酸镁的培养基上都能生长,保持了完整的菌落形态,但是长势不同。在3.0g/L和4.5 g/L浓度时,菌丝长势最好,生长速度最快,二者差异不显著,但与其它处理差异极显著;为6 g/L时菌丝长势较好,1.5 g/L长势较差。可见,在母种培养基上加入3～4.5 g/L硫酸镁对紫平菌丝生长促进作用最为显著,这和弓建国等(2009)[5]的研究结果相似。
3 结论与讨论
试验结果表明,培养基中最适合野生紫平菌丝生长的碳源是麦芽糖,其次是淀粉和蔗糖;氮源是蛋白胨,其次是酵母浸粉;碳氮比为25∶1;添加复合维生素B 10～15 mg/L,硫酸镁3～4.5 g/L,能够明显促进菌丝生长。
综合得出其最适培养基配方为:蛋白胨2.64 g,麦芽糖20.36 g,硫酸镁4 g,复合维生素B 15 mg,琼脂20 g,加水至1 000 ml。
本试验中,适合紫平菌丝生长的碳氮比是25∶1,这和传统上侧耳属真菌生长所要求的碳氮比相差不大[2,3],对下一步栽培配方研究具有重要的参考价值;同时,该设计方案考虑到培养基中营养物质的条件一致问题[4],使试验结果能够正确反映碳氮比对紫平菌丝的影响[2],对今后碳氮比的试验具有借鉴意义;从试验结果可以看出,碳氮比对紫平菌丝生长影响比较大。
试验2.1和2.2可以相互验证,蛋白胨就是紫平的最适氮源,麦芽糖就是紫平的最适碳源,蛋白胨使麦芽糖更有利于紫平菌丝的生长。
【关键词】物质,优化,研究,营养,生长,紫平,菌丝,野生,
参 考 文 献:
[1] 卯晓岚. 中国经济真菌[M].北京:科学出版社,1998,1-762.
[2] 万鲁长,黄春燕,单洪涛,等.不同营养条件对白灵侧耳菌丝生长的影响[J].食用菌学报, 2005,12(4):27-32.
[3] 宫志远,任海霞,李 瑾,等. 白灵菇菌丝生长营养物质优化试验[J].山东农业科学,2008,7:74-76.
[4] 冯改静,李守勉,李 明,等. 不同碳氮比栽培料对猴头菌菌丝及子实体生长的影响[J]. 华北农学报,2007,22(增刊): 131-35.
[5] 弓建国, 徐松鹤. 石头菇母种培养基优化研究[J]. 北方园艺,2009,11:224-226.
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